自噬在骨髓增生異常綜合征疾病演進(jìn)過程中的作用研究.pdf

1、目的：
　　骨髓增生異常綜合征(Myelodysplastic syndrome, MDS)是一組起源于造血干/祖細(xì)胞的克隆性疾病，其共同生物學(xué)特征是骨髓中一系或者多系髓系細(xì)胞分化、成熟障礙，最終導(dǎo)致骨髓造血功能衰竭，且高風(fēng)險(xiǎn)向急性髓系白血病轉(zhuǎn)化(AML)，目前其發(fā)病機(jī)制及治療方案尚未完全明確。自噬作為II型程序性細(xì)胞死亡，已有研究發(fā)現(xiàn)其與惡性血液病的發(fā)生、發(fā)展及耐藥有關(guān)，而其在MDS的發(fā)病及預(yù)后中的作用鮮有報(bào)道。
　　本研

2、究旨在檢測(cè) MDS患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞自噬相關(guān)基因LC3B的表達(dá)情況及骨髓CD34+細(xì)胞自噬活性變化，探討細(xì)胞自噬在MDS發(fā)病過程中的作用，為MDS的治療提供新的靶點(diǎn)。
　　方法：
　　(1)采用實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)檢測(cè)64例骨髓增生異常綜合征(MDS)患者、28例原發(fā)性急性髓系白血病患者(AML)及20例非惡性病貧血患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞LC3B基因mRNA水平表達(dá)情況,并分析MDS患者LC3B mRNA表達(dá)水平

3、與WPSS評(píng)分的關(guān)系。
　　(2)采用Western-blot技術(shù)檢測(cè)LC3B蛋白表達(dá)情況，并分析LC3B蛋白表達(dá)水平與MDS的發(fā)病關(guān)系。
　　(3)采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)技術(shù)檢測(cè)20例MDS患者、5例AML及20例非惡性病貧血患者骨髓CD34+細(xì)胞自噬活性，并分析其與WPSS評(píng)分的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　(1)LC3B mRNA表達(dá)水平:非惡性病貧血組、低危MDS組(WPSS評(píng)分<3分)、高危MDS組(WPS

4、S評(píng)分≥3分)及AML組LC3B mRNA表達(dá)量以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( X±SD)表示分別為12.05±7.67、9.21±4.20、7.38±7.20、3.31±2.02；中位數(shù)及百分位數(shù)M(P25，75)分別為10.92(6.20,15.16)、8.13(6.13,10.50)、5.37(4.06,7.59)、2.43(1.80,4.58)。非惡性病貧血組患者LC3B mRNA水平表達(dá)高于高危MDS組(P=0.003)及AML組(P=0)

5、；低危MDS組高于高危MDS組(P=0.004)及AML組(P=0)；高危MDS組高于AML組(P=0)；非惡性病貧血組與低危MDS組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.128)。LC3B基因mRNA表達(dá)水平與MDS患者WPSS評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(P=0.01;r=-0.324)。
　　(2)LC3B蛋白表達(dá)水平:LC3B蛋白表達(dá)水平與其mRNA表達(dá)水平基本一致：非惡性病貧血組及低危MDS組患者LC3B蛋白表達(dá)水平高于高危MDS組及AML組。

6、
　　(3)骨髓 CD34+細(xì)胞自噬活性(％):骨髓 CD34+細(xì)胞自噬活性與骨髓單個(gè)核細(xì)胞LC3B基因mRNA表達(dá)水平及其蛋白表達(dá)水平基本一致：非惡性病貧血組、低危MDS組(WPSS評(píng)分<3分)、高危MDS組(WPSS評(píng)分≥3分)及AML組骨髓CD34+細(xì)胞自噬活性[均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( X±SD)]分別為79±16、73±21、37±17、45±10及[中位數(shù)及百分位數(shù)M(P25,P75)]分別為80(65,90)、69(51,94

7、)、31(21,55)、50(36,53)。非惡性病貧血組患者骨髓CD34+細(xì)胞自噬活性高于高危MDS組(P=0)及AML組(P=0)；低危MDS組高于高危MDS組(P=0.04)及AML組(P=0.01)；非惡性病貧血組與低危MDS組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.903)；高危MDS組患者骨髓CD34+細(xì)胞自噬活性與AML組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.564)。骨髓CD34+細(xì)胞自噬活性與MDS患者WPSS評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.8

8、87)。
　　結(jié)論：
　　(1)低危MDS組患者LC3B基因表達(dá)及骨髓CD34+細(xì)胞自噬活性水平與非惡性病貧血組患者比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示在低危MDS組患者中，部分病態(tài)骨髓細(xì)胞可能仍保留非惡性細(xì)胞的部分生理功能，使自噬活性水平保持一致。
　　(2)LC3B基因表達(dá)及骨髓CD34+細(xì)胞自噬活性水平在低危MDS組患者中明顯高于高危MDS組及AML組，提示自噬活性的降低，可能促進(jìn)低危MDS組的惡性轉(zhuǎn)化，細(xì)胞自噬可能與M