骨髓增生異常綜合征患者骨髓單個核細胞自噬水平的研究.pdf

1、目的:研究骨髓增生異常綜合征（MDS）患者骨髓單個核細胞 Beclin1、哺乳動物雷帕霉素靶點（mTOR）、微管相關蛋白輕鏈3（LC3）水平，初步探討MDS患者骨髓原代細胞自噬水平的改變。
　　方法:38例MDS患者為實驗組（MDS組），26例非惡性貧血患者為對照組。骨髓細胞鐵染色檢測骨髓細胞內、外鐵含量和環(huán)形鐵粒幼細胞；流式細胞儀檢測骨髓單個核細胞活性氧（ROS）水平；透射電鏡觀察骨髓單個核細胞內自噬泡數量；丹（磺）酰戊二胺（M

2、DC）法檢測骨髓單個核細胞自噬泡水平；免疫熒光法觀察觀察骨髓單個核細胞中微管相關蛋白輕鏈3（LC3）蛋白表達，qPCR法檢測自噬相關基因Beclin1、LC3、mTOR mRNA表達，Western blottiing檢測Beclin1、LC3蛋白的表達。
　　結果:
　　(1)骨髓細胞鐵染色發(fā)現MDS患者細胞外鐵、細胞內鐵和環(huán)形鐵粒幼細胞數量均較對照組增加。
　?。?）流式細胞術檢測到MDS組（n=7）患者骨髓單個核

3、細胞ROS水平（1352.41±667.51）高于對照組ROS水平（n=5，596.46±233.99，P＜0.05）。
　　（3）透射電鏡觀察到MDS患者骨髓細胞內存在雙層膜結構自噬泡，內含溶酶體。
　?。?）MDC染色發(fā)現MDS組（n=4）染色陽性（自噬泡）細胞數目比例（9.75％±2.63%）顯著高于對照組（n=5，2.90%±0.89%， P＜0.05）。
　?。?）免疫熒光法觀察到MDS組（n=4）LC3陽性

4、細胞數目比例（6.13%±1.03%）顯著高于對照組（n=4，1.5%±0.58%， P＜0.05）。
　　（6）qPCR法檢測到低危/中危-1 MDS組（n=14）骨髓單個核細胞Beclin1 mRNA表達水平（3.61±3.02）顯著高于對照組（n=11，1.55±1.03，P＜0.05）；中危-2/高危MDS組（n=8）Beclin1 mRNA表達水平為2.63±2.79，高于對照組，但沒有統計學差異，P＞0.05；低危/中

5、危-1MDS組（n=10）骨髓單個核細胞LC3A mRNA水平(6.56±3.97)顯著高于對照組（n=7，1.21±0.95，P＜0.05）；低危/中危-1MDS組（n=9）骨髓單個核細胞的自噬負性調控基因mTOR mRNA水平(0.39±0.37)顯著低于于對照組（n=9，1.50±1.03，P＜0.05）；中危-2/高危MDS組（n=4）mTOR mRNA表達水平為1.73±1.69，高于對照組，但沒有統計學差異，P＞0.05。<