吉西他濱聯(lián)合順鉑介入化療對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分肺癌A549裸大鼠移植瘤模型的建立及應(yīng)用
　　目的：探討裸大鼠肺癌 A549高效移植瘤模型的建立方法，為進(jìn)行腫瘤的體內(nèi)相關(guān)介入研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：肺癌 A549細(xì)胞接種于裸小鼠右腋皮下，出瘤后制備單細(xì)胞懸液和組織塊分別接種和塞入裸大鼠耳后皮下，共分初次培養(yǎng)細(xì)胞成瘤組（A組）、二次單細(xì)胞懸液成瘤組（B組）和二次組織塊成瘤組（C組）三種方法成瘤，每組6只裸大鼠，觀察3組各裸大鼠的一般情況、成瘤情況、移植瘤的生長(zhǎng)

2、情況及病理表現(xiàn)，并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期的變化。
　　結(jié)果：在移植后4-5天后，在注射或移植處觸及結(jié)節(jié)，7天后呈直徑4-5mm，14天后腫塊直徑10-12mm，呈分葉狀、質(zhì)實(shí)、邊界清、活動(dòng)度可、無(wú)液化，28天后腫塊增大伴中央液化。A、B、C組的出瘤率分別為：52.3％、63.4%和100%，A組與 C組之間差異有顯著性（P<0.01），3組中 C組的出瘤率顯著高于另外兩組，細(xì)胞增殖塊，移植瘤的變異小。移植瘤病理學(xué)鏡下觀：腫瘤細(xì)胞

3、排列紊亂，細(xì)胞核異形明顯，核質(zhì)比例增大，染色質(zhì)深且粗，核大深染，異常核分裂相易見(jiàn)。細(xì)胞周期分析顯示 A、B、C組的細(xì)胞增殖指數(shù)分別為：（32.31±8.72）%、（47.68±4.72）%和（48.61±5.06）%，顯示 A組的增殖指數(shù)與 B組和 C組之間差異有顯著性（P<0.05），而 B組與 C組之間差異無(wú)顯著性（P>0.05）。C組的細(xì)胞 S和 G2/M期比例增高，細(xì)胞增殖指數(shù)顯著高于另外兩組。
　　結(jié)論：二次組織塊成瘤（

4、C組）可顯著提高 A549的成瘤率，是一種高效的裸大鼠移植瘤模型建立方法。
　　第二部分吉西他濱聯(lián)合順鉑介入化療對(duì)肺癌A549裸大鼠移植瘤的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：觀察吉西他濱聯(lián)合順鉑動(dòng)脈化療與靜脈化療對(duì)人肺腺癌A549裸大鼠移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用，探索最佳給藥途徑。
　　方法：人源肺腺癌（A549）細(xì)胞系經(jīng)傳代培養(yǎng)后，用二次組織塊成瘤法，與祼大鼠進(jìn)行腫瘤移植，建立裸大鼠肺癌移植瘤模型。分為正常對(duì)照組、假手術(shù)對(duì)照組、靜脈化療

5、組與動(dòng)脈化療組各10只，動(dòng)態(tài)觀察裸大鼠一般情況、腫瘤體積的變化、對(duì)荷瘤裸大鼠的抑瘤率、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表達(dá)水平、HE染色及免疫組化Ki67的檢測(cè)，比較吉西他濱聯(lián)合順鉑兩種給藥途徑對(duì)肺癌A549移植瘤的抑制效應(yīng)。
　　結(jié)果：動(dòng)脈化療組與靜脈化療組移植瘤生長(zhǎng)均受到不同程度的抑制，動(dòng)脈化療組抑制尤為明顯，與其他組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。4組腫瘤的體質(zhì)量（g）為動(dòng)脈化療組（1.91±0.19）、靜脈化療組

6、（2.61±0.21）低于荷瘤對(duì)照組（4.58±0.46）及假手術(shù)對(duì)照組（4.71±0.53），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，動(dòng)脈化療組、靜脈化療組的抑瘤率分別為57.6%、42.4%，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。移植瘤HE染色提示動(dòng)脈與靜脈給藥組均存在凋亡現(xiàn)象，但動(dòng)脈化療組凋亡較靜脈化療組明顯。Bcl-2與Caspase3蛋白水平表達(dá)均顯示，動(dòng)脈與靜脈給藥皆可有效促進(jìn)腫瘤凋亡，尤其以動(dòng)脈給藥效果更明顯。免疫組化顯示各組K

7、i-67均為陽(yáng)性，其中動(dòng)脈化療組顯示Ki-67增殖指數(shù)最低。
　　結(jié)論：吉西他濱聯(lián)合順鉑經(jīng)動(dòng)脈灌注更能有效控制人肺癌細(xì)胞移植瘤的生長(zhǎng)，且動(dòng)脈注射吉西他濱和順鉑較靜脈注射有不同程度的優(yōu)勢(shì)，經(jīng)動(dòng)脈化療途徑在肺癌移植瘤治療中具有更加明顯的優(yōu)勢(shì)。
　　第三部分吉西他濱及順鉑經(jīng)動(dòng)脈、靜脈注射后血漿、組織藥物濃度的變化
　　目的：分析吉西他濱及順鉑通過(guò)動(dòng)脈及靜脈途徑注射后血漿及組織內(nèi)藥物濃度的變化情況。
　　方法：40只帶瘤

8、裸大鼠，隨機(jī)分為動(dòng)脈注射組、靜脈注射組兩大組，帶瘤裸大鼠分別經(jīng)動(dòng)脈及靜脈注射吉西他濱及順鉑。于注射后5、10、20、40、80、120、360、720 min采血液標(biāo)本，注射后10、40、120、720 min各組分別處死5只裸大鼠，取瘤體組織標(biāo)本，以高效液相色譜法測(cè)定血漿及腫瘤組織中吉西他濱濃度，ICP-MS法測(cè)定血漿及腫瘤組織中的鉑含量，計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　結(jié)果：經(jīng)動(dòng)脈及靜脈注射兩種藥物后，血漿及腫瘤組織中的藥物濃度出現(xiàn)

9、規(guī)律性變化，其變化過(guò)程均可用兩室模型來(lái)描述。動(dòng)脈注射組藥物的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)與靜脈注射組的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)不同，動(dòng)脈組注射藥物后，血漿藥物峰濃度[吉西他濱：（20.84±10.11）μg/mL，順鉑：（15.13±7.12）μg/mL]均低于靜脈組[吉西他濱：（28.96±7.02）μg/mL，順鉑：（21.64±9.72）μg/mL]，靶組織內(nèi)藥物峰濃度[吉西他濱：（20.18±9.43）μg/mL，順鉑：（6.98±0.31）μg/mL

10、]均高于靜脈組[吉西他濱：（18.19±10.30）μg/mL，順鉑：（3.04±0.11）μg/mL]，靶組織內(nèi)藥物曲線下面積[吉西他濱：（2641±411）μg/（min·mL），順鉑：（6025±870）μg/（min·mL）]均明顯高于靜脈組[吉西他濱：（1663±568）μg/（min·mL），順鉑：（1780±883）μg/（min·mL）]，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或0.01）。
　　結(jié)論：動(dòng)脈注射組吉西他濱