復(fù)方雙丹活性組分篩選及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)研究.pdf

1、心血管疾病是目前導(dǎo)致人類(lèi)死亡的主要疾病之一。中藥雙丹方(丹參、丹皮)在治療心血管疾病方面有獨(dú)特的療效。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMMSCs)具有多分化潛能，可定向分化為心肌細(xì)胞，且沒(méi)有來(lái)源的倫理問(wèn)題，這為BMMSCs移植治療心臟病提供了廣闊的前景。但中藥是個(gè)復(fù)雜的化學(xué)物質(zhì)體系，雙丹方成分復(fù)雜，有效成分難以闡明。幼年大鼠骨髓比較少，大鼠BMMSCs的分離純化比較困難。 本論文循活性指導(dǎo)的藥物先導(dǎo)化合物篩選思想，復(fù)制大鼠乳鼠心肌細(xì)胞缺氧復(fù)

2、氧模型，模擬缺血再灌注損傷。以乳酸脫氫酶(LDH)活性為檢測(cè)指標(biāo)，對(duì)雙丹方51個(gè)組分進(jìn)行活性篩選。研究發(fā)現(xiàn)丹參3個(gè)組分對(duì)心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷有保護(hù)作用，其中2個(gè)組分為脂溶性成分，1個(gè)組分為水溶性成分。丹皮有6個(gè)組分對(duì)心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷有保護(hù)作用，其中4個(gè)組分為脂溶性成分，2個(gè)組分為水溶性成分。這9個(gè)有效組分主要成分為丹參醛類(lèi)、丹參酮類(lèi)、丹參醇類(lèi)以及醌類(lèi)物質(zhì)。 本論文成功地進(jìn)行了大鼠BMMSCs的分離純化與培養(yǎng)。用Percoll

3、分離液采用密度梯度離心法，對(duì)BMMSCs進(jìn)行分離；采用差速貼壁法對(duì)BMMSCs進(jìn)行純化。采用流式細(xì)胞術(shù)與激光共聚焦法對(duì)純化的細(xì)胞()CD類(lèi)表面抗原進(jìn)行鑒定，其中CD29、CD44、CD105、CD166表達(dá)呈陽(yáng)性，而CD14、CD34、CD45表達(dá)呈陰性，這與BMMSCs的表面抗原表達(dá)情況相符。采用RT-PCR方法鑒定了三個(gè)干細(xì)胞標(biāo)志基因，其中nestin和NST為高表達(dá)基因，而Oct-4為弱表達(dá)基因。以上結(jié)果共同證明，我們從大鼠骨髓中