人纖維環(huán)細胞與骨髓間充質(zhì)干細胞Transwell共培養(yǎng)研究.pdf

1、背景：椎間盤退變常引起頸肩痛和腰腿痛。常用的手術(shù)治療方法雖可提供良好的短期療效，但手術(shù)改變了脊柱的生物力學(xué)，導(dǎo)致相鄰椎間盤的進一步退變。因此，尋找可在椎間盤退變早期進行干預(yù)并維持脊柱生物力學(xué)的組織工程修復(fù)方法，成為目前研究的焦點。骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)更是成為研究椎間盤退變修復(fù)的干細胞治療的熱點。纖維環(huán)(AF)是椎間盤的重要組成結(jié)構(gòu)，其結(jié)構(gòu)和功能的完整性在椎間盤退變防治中有著重要意義。
　　 目的：探討人的纖維環(huán)(AF)

2、細胞與骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)在Transwell共培養(yǎng)后，對AF細胞的細胞增殖和細胞外基質(zhì)合成的影響，以及BMSCs是否具有向AF細胞分化的能力。
　　 方法：分別對5例年齡在40歲以下脊柱手術(shù)病人的纖維環(huán)組織和骨髓標本進行分離、培養(yǎng)AF細胞和BMSCS，分別吸取第三代的AF細胞和BMSCs，按1∶1的細胞比例分別植于Transwell共培養(yǎng)系統(tǒng)中，下室植入BMSCs，上室植入AF細胞。并且建立3個細胞培養(yǎng)組，即BMSC

3、s與AF細胞共培養(yǎng)組（實驗組），BMSCs單獨培養(yǎng)組和AF細胞單獨培養(yǎng)組作為對照組。培養(yǎng)3周后，運用倒置相差顯微鏡觀察細胞的形態(tài)變化；分別用HE染色、Ⅰ型膠原免疫組化染色和流式細胞儀對兩種細胞鑒定；運用熒光定量PCR法檢測各細胞培養(yǎng)組蛋白聚糖Aggrecan、Ⅰ型膠原蛋白mRNA及Sox9的表達變化。
　　 結(jié)果：兩種細胞在分離培養(yǎng)后經(jīng)過鑒定確定為AF細胞和BMSCs。在倒置相差顯微鏡觀察下，共培養(yǎng)組中AF細胞和BMSCs在細胞