沈陽(yáng)部分地區(qū)金黃色葡萄球菌對(duì)萬古霉素敏感性變化的機(jī)制及流行病學(xué)研究.pdf

1、目的:本研究旨在探討沈陽(yáng)地區(qū)部分醫(yī)院臨床分離的金黃色葡萄球菌對(duì)萬古霉素敏感性變化，及其與臨床治療失敗關(guān)系;是否存在hVISA菌株;并對(duì)萬古霉素MIC值漂移(MIC＞1.5μg/ml)的菌株、可能存在的hVISA菌株對(duì)萬古霉素敏感性變化的機(jī)制和分子流行病學(xué)進(jìn)行初步探討。
　　 方法:實(shí)驗(yàn)菌株來源于2010年12月～2O12年12月沈陽(yáng)地區(qū)部分醫(yī)院臨床分離的金黃色葡萄球菌172株，其中MRSA102株，MSSA70株。用E-test

2、法檢測(cè)上述菌株的萬古霉素MIC值;挑選MIC值在1.5～3.0μg/ml之間的MRSA菌株51株，用含萬古霉素4.0μg/ml的腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基篩選hVISA菌株，用含萬古霉素8.0μg/ml的腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基篩選MIC值大于8.0μg/ml的VRSA菌株。在無藥（萬古霉素）血平皿培養(yǎng)基中對(duì)MRSA菌株進(jìn)行連續(xù)傳代培養(yǎng)，并檢測(cè)其對(duì)萬古霉素MIC值的變化。對(duì)沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院分離的70株不同萬古霉素MIC值的MRSA對(duì)萬古霉素治療有效性進(jìn)

3、行比較.用PFGE法對(duì)沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院臨床分離的42株MRSA進(jìn)行分型，分析臨床流行株的PFGE型別與其MIC值的關(guān)聯(lián)。選擇MRSA5株(MIC值為2.0μg/ml的3株、MIC值為1.5μg/ml的2株)及ATCC292131株傳代培養(yǎng)50代，用透射電鏡觀察每傳10代時(shí)細(xì)胞壁厚度的變化，并同時(shí)測(cè)定細(xì)菌的MIC值，通過PCR和測(cè)序方法，選擇4個(gè)與細(xì)胞壁厚度相關(guān)的基因(graR、rpoB、walK和clpP)，分析基因變化與細(xì)胞壁厚度變化之

4、間的關(guān)系。
　　 結(jié)果:172株沈陽(yáng)部分地區(qū)臨床分離的金黃色葡萄球菌（MRSA102株，MSSA70株），對(duì)萬古霉素MIC值分布在1.0～2.0μg/ml之間有146株，占84.89％，102株MRSA對(duì)萬古霉素MIC值分布在1.0μg/ml～2.0μg/ml之間有88株，占86.27％，其中有兩株MIC值為2.5和3.0μg/ml。70株MSSA對(duì)萬古霉素的MIC值在1.0-1.5μg/ml之間有46株，占65.71％，其余小

5、于1.0μg/ml。含萬古霉素4.0μg/ml的腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基未篩選出hVISA菌株，同時(shí)含萬古霉素8.0μg/ml的腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基也未篩選出VRSA菌株。不同萬古霉素MIC值的MRSA感染患者治療效果的有顯著性差異(P＜0.05)，萬古霉素MIC漂移(＞1.5μg/ml)MRSA感染患者使用萬古霉素治療的效果較(＜1.5μg/ml)差。PFGE法將沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院分離的42株MRSA分為A～E5個(gè)型別，A型33株，為主要克隆流行

6、株，其中A1亞型最多32株、A2亞型1株、B型4株（與A1亞型相差三個(gè)條帶親緣關(guān)系較近）。A型主要分布在急診科、急診監(jiān)護(hù)室、腦外科、腦外監(jiān)護(hù)室。其他型別各科室、門診零散分布。金黃色葡萄球菌的PFGE分型和其對(duì)萬古霉素的MIC值結(jié)果顯示，臨床流行MRSA的PFGE分型與其MIC值未見必然聯(lián)系，但與A1亞型親緣關(guān)系較近的A2亞型1株、B型4株均為萬古霉素MIC值較高的分離株。MRSA菌株在無藥血平皿上傳代培養(yǎng)過程中，其對(duì)萬古霉素的MIC值在

7、培養(yǎng)到10代時(shí)有明顯的升高，隨后開始下降;初始分離MIC值為2.0μg/ml以上的3株菌株，直到傳代培養(yǎng)50代時(shí)，菌株對(duì)萬古霉素的MIC值才恢復(fù)到初代菌株的MIC水平;2株初始MIC為1.5μg/ml的臨床分離株，1株第50代的MIC降至初始水平1.5μg/ml，另一株則稍低于1.5μg/ml。經(jīng)透射電鏡下觀察:其總體趨勢(shì)是，在不同萬古霉素MIC值的細(xì)胞群體間，其細(xì)胞壁厚度存在一定差異。整體來說菌株對(duì)萬古霉素MIC值高的，其細(xì)胞壁也較厚

8、。PCR擴(kuò)增graR、rpoB、walK和clpP等四個(gè)基因，經(jīng)測(cè)序后與標(biāo)準(zhǔn)株比較，基因無突變。
　　 結(jié)論:本研究未篩選出hVISA菌株，可知我院經(jīng)萬古霉素治療失敗的MRSA與hVISA菌株的出現(xiàn)無關(guān)，大部分臨床治療失敗可能與菌株對(duì)萬古霉素MIC值漂移(MIC＞1.5μg/ml)有關(guān)。MIC值漂移菌株脫離抗生素環(huán)境連續(xù)傳代，其MIC值未見下降，提示MIC值的漂移可能也涉及到了穩(wěn)定的遺傳變異。金黃色葡萄球菌對(duì)萬古霉素的MIC值在