HIF-1-HRE通路在大鼠缺血、二氮嗪后處理心肌保護中作用機制的研究.pdf

1、目的：
　　明確缺血后處理、二氮嗪后處理是否通過開放線粒體ATP敏感性鉀通道，進而激活低氧誘導(dǎo)因子1/低氧反應(yīng)元件通路，減輕心肌缺血再灌注損傷。
　　方法：
　　將健康成年雄性 SD大鼠經(jīng)戊巴比妥鈉及肝素腹腔注射麻醉后，迅速開胸取心，建立Langendorff離體心臟缺血再灌注模型，隨機將各大鼠心臟分為以下10組進行處理，每組8只大鼠：N組、I/R組、IPO組、IPO+5HD、IPO+2ME2組、DPO組、DPO+5H

2、D組、DPO+2M E2組、I/R+5HD組以及I/R+2 ME2組。N組：K-H液灌注120min。I/R組：K-H液平衡灌注20min后，停灌40min，再復(fù)灌60min。IPO組：K-H液平衡灌注20min，停灌40min，停灌結(jié)束后即刻進行10s的再灌注和10s的停灌6個循環(huán)，6個循環(huán)后持續(xù)灌注58min。IPO+5HD組：在IPO組基礎(chǔ)上，于停灌35min后給予線粒體 ATP敏感性鉀通道特異性阻滯劑五羥基葵酸，并持續(xù)5min。

3、IPO+2ME2組：在IPO組基礎(chǔ)上，于停灌30min后給予低氧誘導(dǎo)因子1的特異性阻斷劑二甲基雌二醇，并持續(xù)10min。DPO組：K-H液灌注平衡20min，停灌40min后即刻用二氮嗪溶液復(fù)灌5min，再用K-H液復(fù)灌55min。DPO+5HD組、DPO+2ME2組以及I/R+5HD組、I/R+2ME2組，分別在DPO組、I/R組基礎(chǔ)上分別使用二甲基雌二醇以及五羥基葵酸，且阻斷劑使用方法與IPO+5HD組、IPO+2ME2組一致。上述

4、各組中除N組外，其余各組心臟在停灌后均給予灌注4℃ ST. Tho mas停跳液使心臟停跳，并在全心缺血期間保持環(huán)境溫度在32℃。檢測指標：（1）各組心臟在平衡末和復(fù)灌末分別記錄心臟血流動力學(xué)指標；（2）各組心臟在復(fù)灌末，心臟TTC染色檢測梗死面積；（3）于復(fù)灌末取左心室組織電鏡下觀察心肌超微結(jié)構(gòu)并進行線粒體評分；（4）于復(fù)灌末取左室組織采用RT-PCR、Western blot法，分別檢測HIF-1α、HO-1、iNOS、VEGF的m

5、RN A及蛋白質(zhì)的表達情況。
　　結(jié)果：
　　I/R組與N組比較，心肌梗死面積增大、心肌細胞線粒體Flameng評分增高（P＜0.05），電鏡下可見缺血再灌注損傷明顯損傷了心肌結(jié)構(gòu)，有肌絲斷裂溶解，空泡形成，線粒體明顯腫脹、線粒體嵴膜間隙增大、有破裂現(xiàn)象；IPO組、DPO組分別與I/R組比較，可見缺血再灌注損傷的心肌梗死面積減小、心肌細胞線粒體Flameng評分降低（P＜0.05），而其心肌結(jié)構(gòu)基本同于N組，肌絲斷裂溶解少，

6、線粒體結(jié)構(gòu)基本正常、線粒體結(jié)構(gòu)清楚，可見少量線粒體腫脹。此外，缺血后處理、二氮嗪后處理均能使得HIF-1α及HIF-1/HRE通路下游蛋白表達量增加（P＜0.05），也使得HIF-1/HRE通路下游基因（HO-1、iNOS以及VEGF）mRNA表達量增加（P＜0.05）；而IPO、DPO上述心肌保護作用及HIF-1/HRE通路相關(guān)產(chǎn)物的激活作用，能夠在使用mitoKATP通道特異性阻滯劑或者HIF-1α特異性阻斷劑后被消除（P＜0.05