家蠶繭層醇溶物的活性成份及抑制UVB-DMBA誘導(dǎo)的小鼠皮膚損傷和腫瘤發(fā)生.pdf

1、家蠶繭殼中除了絲素和絲膠兩種主要的蛋白外，還有少量的色素、蠟質(zhì)、碳水化合物等組成的“雜質(zhì)”。已有研究證實(shí)通過(guò)醇提的方法獲得的絲膠層提取物主要為黃酮類物質(zhì)和游離氨基酸，在家蠶繭殼中黃酮類物質(zhì)幾乎都是以其糖苷類形式存在，主要是槲皮素糖苷和一小部分山奈酚糖苷。在本文中，我們建立一種快速、高效測(cè)定家蠶繭殼尤其是大造繭殼或是由大造培育的新品種綠繭中黃酮類物質(zhì)中苷元含量的準(zhǔn)確方法，用醇酸水溶液輔助水解的方法將槲皮素和山奈酚苷元從其糖苷中釋放出來(lái)，再

2、通過(guò)HPLC-DAD測(cè)定糖苷元的含量。250 mg大造繭殼碎片加入到甲醇-鹽酸-水(7:2:1,V/V/V)三元溶液中，在75C加熱4h水解。通過(guò)五次重復(fù)試驗(yàn)后，測(cè)到大造繭殼中槲皮素和山奈酚苷元含量分別為1.98 mg/g和0.42 mg/g，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為3.01％和2.38%。用此方法測(cè)得繭殼中苷元槲皮素和山奈酚的回收率分別為99.56%和99.17%。上述這種方法測(cè)得的總黃酮即槲皮素和山奈酚的總和為2.40±0.07 mg/g，而用

3、傳統(tǒng)的以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品的比色方法測(cè)得的總黃酮雖然為2.59±0.48 mg/g，但按分子量計(jì)算其槲皮素總量卻為1.28±0.04 mg/g，僅為上述方法測(cè)定值的一半。另外，利用11種普通繭、彩色繭、大造繭或熒光蠶繭進(jìn)行總黃酮含量比較分析表明，這兩種分析方法測(cè)定的結(jié)果差異很大，幾乎沒(méi)有相關(guān)性。所以，本文報(bào)道的通過(guò)醇酸水溶液輔助水解-HPLC-DAD測(cè)定繭殼中總黃酮的方法比以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品的傳統(tǒng)比色方法更為準(zhǔn)確，對(duì)于繭殼具有專屬性，這對(duì)繭殼資源

4、的開(kāi)發(fā)與綜合利用具有重要的指導(dǎo)意義。
　　長(zhǎng)期暴露在UVB的輻射下會(huì)導(dǎo)致人體皮膚細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激，引起皮膚的曬傷、光老化甚至是腫瘤的發(fā)生。本文還對(duì)大造繭絲膠層醇提物(EE)的抗氧化能力、抗炎癥和抗腫瘤活性進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，在UVB/DMBA誘導(dǎo)的小鼠皮膚瘤模型中，溶劑組(VC)小鼠背部腫瘤為5.1，而絲膠層醇提物低劑量和高劑量涂抹組分別為3.2個(gè)和2.6個(gè)。UVB/DMBA處理使小鼠皮膚內(nèi)的抗氧化能力受到極大的破壞，然而絲膠層

5、醇提物涂抹組的總抗氧化能力卻提高到1.63 U/mg蛋白，接近正常水平。絲膠醇提物涂抹處理組小鼠組小鼠腫瘤內(nèi) NF-?B的表達(dá)水平從1.16 ng/mg蛋白降低到0.53 ng/mg蛋白。這些體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果充分說(shuō)明，大造繭殼絲膠層醇溶物在小鼠表皮的涂抹處理，能夠在細(xì)胞和分子水平上減小UVB造成的光損傷，它通過(guò)調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激和炎癥因子的水平來(lái)減小皮膚的炎癥反應(yīng)和腫瘤細(xì)胞的增殖。這種繭層醇提物能夠提升小鼠體內(nèi)抗氧化酶類的活性，減小 ROS對(duì) D