我院耐亞胺培南銅綠假單胞菌臨床耐藥分布特點(diǎn)及機(jī)制研究.pdf

1、目的: 銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)是臨床上常見(jiàn)的條件致病菌，其臨床感染率已躍居病原菌的首位。隨著抗生素的廣泛應(yīng)用，銅綠假單胞菌對(duì)亞胺培南等碳青霉烯類(lèi)抗生素耐藥已成為臨床治療中的難題。本論文對(duì)臨床分離的銅綠假單胞菌分別進(jìn)行亞胺培南等14種抗生素的耐藥性試驗(yàn)并對(duì)不同科室耐藥情況進(jìn)行比較，旨為臨床合理使用抗生素提供科學(xué)依據(jù)。另外，為了了解銅綠假單胞菌對(duì)亞胺培南的耐藥機(jī)制，本論文從金屬β內(nèi)酰胺酶的

2、產(chǎn)生、外排泵過(guò)度表達(dá)和外膜蛋白OprD2缺失及低表達(dá)等方面分別進(jìn)行了研究。 方法: 1.對(duì)我院2005年1月-2007年6月銅綠假單胞菌感染的住院患者進(jìn)行調(diào)查，統(tǒng)計(jì)銅綠假單胞菌對(duì)亞胺培南等14種抗生素的耐藥性試驗(yàn)并對(duì)不同科室耐藥情況。 2.對(duì)溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院2005年1月-2007年6月從臨床分離的150株非重復(fù)的銅綠假單胞菌用美國(guó)德靈公司的全自動(dòng)微生物鑒定和藥敏分析儀對(duì)亞胺培南(IMP)等14種常用抗生素

3、的最低抑菌濃度(MIC)進(jìn)行檢測(cè)；選出對(duì)亞胺培南耐藥的銅綠假單胞菌64株做為受試株，采用EDTA雙紙片協(xié)同法對(duì)其進(jìn)行金屬β內(nèi)酰胺酶的抑制實(shí)驗(yàn)，測(cè)定金屬β內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生，同時(shí)用PCR方法檢測(cè)金屬β內(nèi)酰胺酶的基因表達(dá)；用主動(dòng)外排泵抑制劑氰氯苯蹤(CCCP)對(duì)其進(jìn)行主動(dòng)外排表型陽(yáng)性菌的篩選并PCR擴(kuò)增檢測(cè)；用PCR方法檢測(cè)外膜蛋白OprD2缺失。 結(jié)果: 1.2005年1月-2007年6月從臨床送檢標(biāo)本中共分離銅綠假單胞菌15

4、0株，其中對(duì)亞胺培南耐藥的64株，占42.6％(64/150)。 2.64株耐亞胺培南銅綠假單胞菌中，痰標(biāo)本占絕大部分，占85.9％(55/64)。64株耐亞胺培南銅綠假單胞菌感染病例病區(qū)分布，以ICU病區(qū)占首位，呼吸科其次，然后是神經(jīng)內(nèi)科和神經(jīng)外科病區(qū)，以上四個(gè)病區(qū)總共約占80.4％。 3.經(jīng)表型篩選試驗(yàn)16株為產(chǎn)MBL陽(yáng)性，占試驗(yàn)菌株的14.06％(9/64)。以16株MBL陽(yáng)性株P(guān)CR擴(kuò)增：發(fā)現(xiàn)4株攜帶VIM基因和

5、3株攜帶IMP基因；其他為陰性結(jié)果。 4.在64株耐亞胺培南PA菌株中有17株細(xì)菌在加入CCCP值后，MIC值下降了2個(gè)梯度或者兩個(gè)梯度以上。上述17株主動(dòng)外排表型陽(yáng)性菌中5株(7.81％)同時(shí)檢測(cè)出OprM、MexB基因；有9株(14.06％)僅擴(kuò)增出OprM基因而沒(méi)有MexB基因；有3株(4.69％)未擴(kuò)增出外排基因。表型檢測(cè)結(jié)果表明應(yīng)用外排泵抑制劑方法篩選主動(dòng)外排泵與基因擴(kuò)增結(jié)果符合率為82.35％(14/17)，比較可靠

6、。 5.將64株耐亞胺培南的銅綠假單胞菌PCR擴(kuò)增OprD2基因，共11株細(xì)菌未能得到產(chǎn)物，占17.19％(11/64)，說(shuō)明該11株菌發(fā)生了孔道蛋白缺失。 結(jié)論: 1.從本院調(diào)查結(jié)果中分析，銅綠假單胞菌對(duì)亞胺培南耐藥率達(dá)42.4％，其感染部位大部分在呼吸道，主要在ICU病區(qū)、呼吸內(nèi)科、神經(jīng)內(nèi)科及神經(jīng)外科等病區(qū)內(nèi)流行。 2.體外藥敏試驗(yàn)顯示，氨基糖苷類(lèi)抗菌藥物對(duì)耐亞胺培南銅綠假單胞菌耐藥率較低，其次為酶抑