苦參素影響ARID1A在肝癌細(xì)胞株MHCC97L和MHCC97H中的表達(dá).pdf

1、目的:檢測ARID1A基因與蛋白在人肝癌細(xì)胞株MHCC97L、MHCC97H和人正常肝細(xì)胞株L02中表達(dá)的變化，并觀察苦參素(OM)對不同轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細(xì)胞株MHCC97L和MHCC97H的抑制作用及其對ARID1A表達(dá)的影響，探討苦參素抑制肝癌的可能作用機(jī)制。
　　方法:以人肝癌細(xì)胞株MHCC97L、MHCC97H和人正常肝細(xì)胞株L02細(xì)胞為研究對象。(1)利用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)檢測ARID1A在3種細(xì)胞中的表達(dá)與定位;(2)用實(shí)

2、時(shí)熒光定量PCR技術(shù)和Western blot技術(shù)分別檢測ARID1AmRNA和BAF250a蛋白在3種細(xì)胞株中的表達(dá);(3) MTT法檢測OM對MHCC97L和MHCC97H細(xì)胞增殖的影響;(4)用qRT-PCR技術(shù)和Western blot技術(shù)分別檢測OM干預(yù)后ARID1AmRNA和BAF250a蛋白在2株肝癌細(xì)胞中的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　(1)細(xì)胞免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)ARID1A在MHCC97L、MHCC97H和L02細(xì)

3、胞有不同表達(dá)，且均定位于細(xì)胞核中;
　　(2) qRT-PCR檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ARID1AmRNA在MHCC97L和MHCC97H細(xì)胞中的表達(dá)均低于L02細(xì)胞，但在MHCC97L和MHCC97H之間的相對表達(dá)量比較無差異;
　　(3) Western blot檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)在MHCC97L和MHCC97H細(xì)胞中BAF250a蛋白的表達(dá)均低于L02細(xì)胞，但在MHCC97L和MHCC97H之間的表達(dá)比較無差異。
　　(4) M

4、TT法觀察發(fā)現(xiàn)不同濃度和時(shí)間OM干預(yù)MHCC97L和MHCC97H細(xì)胞后，OM濃度越高，細(xì)胞生長抑制率越高，呈劑量依賴性，隨著OM干預(yù)時(shí)間延長無明顯時(shí)間依賴性。
　　(5) qRT-PCR檢測OM干預(yù)MHCC97L和MHCC97H細(xì)胞后發(fā)現(xiàn):與陰性對照組0mg/ml組比較，在濃度為0.5mg/ml-2.0mg/ml范圍時(shí)，ARID1A mRNA在MHCC97L和MHCC97H細(xì)胞中相對低表達(dá)，但在濃度為1.0mg/ml-4.0mg

5、/ml范圍時(shí)其相對表達(dá)量顯示出上升趨勢。同一濃度下ARID1AmRNA在MHCC97L和MHCC97H細(xì)胞中的表達(dá)無明顯差異。
　　(6) Western blot檢測OM干預(yù)MHCC97L和MHCC97H后與對照組0mg/ml組比較，MHCC97L和MHCC97H細(xì)胞中BAF250a蛋白在OM濃度為0.5-4.0mg/ml范圍時(shí)表達(dá)量增多。在0.5mg/ml和1.0mg/ml濃度下，MHCC97L細(xì)胞中BAF250a蛋白的表達(dá)高

6、于MHCC97H細(xì)胞。
　　結(jié)論:
　　(1)ARID1A在肝癌細(xì)胞系和L02中存在不同的表達(dá)，MHCC97L和MHCC97H細(xì)胞中ARID1A的表達(dá)低于人正常肝細(xì)胞株L02。
　　(2)苦參素對MHCC97L和MHCC97H人肝癌細(xì)胞株有抑制作用，苦參素能促進(jìn)MHCC97L和MHCC97H肝癌細(xì)胞系中ARID1A編碼的蛋白的表達(dá)，對惡性程度較低的MHCC97L細(xì)胞作用較明顯;上調(diào)ARID1A蛋白的表達(dá)可能是苦參素抑制