運用反向聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)檢測MHCC97-H肝癌細(xì)胞整合的乙肝病毒序列.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、肝細(xì)胞癌（HCC）是一種預(yù)后很差的惡性腫瘤，亞洲是全球發(fā)病率最高的地區(qū)。許多生物和化學(xué)物質(zhì)是HCC的主要病原，如乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）和黃曲霉素。我國是HBV感染和HCC的高發(fā)地區(qū)，約10％的人群感染HBV，其慢性攜帶者部分最終發(fā)展成肝細(xì)胞癌。HBV的感染與肝細(xì)胞癌（HCC）的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，HBV DNA與肝細(xì)胞基因組DNA的整合在HCC的發(fā)病過程中具有十分重要的意義。HBV DNA整合機制和后果的研究將進一

2、步闡明HCC發(fā)生的分子生物學(xué)機制，為探索新型的治療技術(shù)和治療方法奠定基礎(chǔ)。 本研究首先運用普通聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)，確定乙肝病毒基因整合位點的大致位置，并據(jù)此在病毒基因鄰近整合斷端處設(shè)計兩對反向引物，然后使用內(nèi)切酶ApaⅠ和NcoⅠ分別對病毒基因組左側(cè)和右側(cè)進行酶切。對酶切片斷進行自身環(huán)化后，運用反向聚合酶鏈反應(yīng)（IPCR）對人高轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞株MHCC97-H基因組中整合序列進行擴增。然后將PCR產(chǎn)物轉(zhuǎn)入pGEM-T載

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