KIR基因?qū)Ξ惢蛟煅杉毎浦差A(yù)后的影響及其機制研究的初步探討.pdf

1、本文從以下及部分進行了論述。
　　第一部分 KIR基因型、單倍型和受配體模式分析對異基因造血干細胞移植預(yù)后的影響
　　目的:建立殺傷細胞免疫球蛋白樣受體(killer cell immunoglobulin receptor,KIR)基因型、單倍型及受配體缺失模式,分析其對異基因造血干細胞移植(allogeneic hemotopoietic stem cell transplantation, allo-HSCT)預(yù)后的影

2、響。
　　方法:采用序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)方法,對進行HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1高分辨的供、受者進行KIR檢測,建立三種KIR分型模式(供受體KIR基因模式、KIR/HLA受配體缺失模式、供體KIR單倍體模式)。
　　結(jié)果:1.供受體KIR基因模式:即供者與受者KIR受體基因是否相合。當供受者KIR基因型完全相合時,即為供受體KIR基因相合。當供受者KIR不完全相合時即為供受者KIR基因錯配。

3、　　2.供受體KIR/HLA受配體模式分析:當受者缺乏與供者KIR相合的HLA配體時即為供受體KIR/HLA受配體缺失模式。
　　3.KIR單體型分型:①A單體型:以抑制性KIR(iKIR)為主,僅有唯一的激活性KIR為KIR2DS4,KIR2DS4可進一步分為2DS4完整型、2DS4完整/缺失型、2DS4缺失型三組亞型;②B單體型:包含多種激活性KIR(aKIR)(KIR2DS1、KIR2DS2、KIR2DS3、KIR2DS5、

4、KIR3DSl)的不同組合。KIR-A/A基因型僅包含A單體型,KIR-A/B基因型同時包含A單體型和B單體型, KIR-B/B基因型僅包含B單體型,A/B基因型和B/B基因型合稱為B/x基因型。A/A基因型可分為AA-1(完整型),AA-2(完整/缺失型)和AA-3(缺失型)。B單體型可分為15種不同的單體B1–B15。KIR單倍體根據(jù)其基因在著絲粒(centromeric, Cen)和端粒端(telomeric,Tel)的分布可進一

5、步分析。
　　結(jié)論:供受體KIR基因型模式、供受體KIR/HLA受配體模式及供體KIR單倍體模式的建立對于分析KIR基因?qū)Ξ惢蛟煅杉毎浦差A(yù)后的影響具有重要意義。
　　第二部分 KIR基因?qū)盒匝翰』颊咄鸋LA全相合造血干細胞移植預(yù)后的影響
　　目的:探討KIR基因型及單倍型對同胞全相合造血干細胞移植的影響。
　　方法:采用序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)方法,對219對HLA-A、-B、-C、-DRB1、-D

6、QB1高分辨基因分型全相合的同胞供、受者進行KIR基因分型,分別應(yīng)用供受體KIR基因模式、KIR/HLA受配體缺失模式、供體KIR單倍體模式及其著絲粒(Cen)和端粒端(Tel)分析KIR對同胞全相合造血干細胞移植預(yù)后的影響。
　　結(jié)果:2005年3月~2012年10月在蘇州大學附屬第一醫(yī)院接受同胞HLA全相合造血干細胞移植的219例患者中,男性120例,女性99例。其中AML111例,MDS17例, ALL40例,CML33例,

7、NHL18例。中位年齡38歲(8歲-63歲)。中位隨訪時間14月(3月-93月),6例失訪。所有患者均接受清髓性預(yù)處理。192例患者接受BuCy預(yù)處理,27例患者接受TBI+Cy預(yù)處理?；剌敻杉毎緾D34+細胞:3.79(1.36-12.0)×106/kg。五年總生存率(OS)為76.2％,無復(fù)發(fā)生存率(RFS)為69.6％。AML/MDS, ALL和CML的OS分別為72.7％,67.9％和93.5％(P=0.156)。
　　

8、在供受體KIR基因模式中,供受體KIR基因不合組5年OS明顯高于相合組(87.3％vs.69.3％;P=0.0268),Ⅲ-Ⅳ急性GVHD低于相合組(4.6％vs.13.6％;P=0.029)。在KIR/HLA受配體缺失模式中,受體HLA為C1組與C2組比較,急性GVHD的發(fā)生率明顯下降(23.2％vs.43.2％;P=0.002),在AML患者中效果更顯著(21.5％vs.49.0％;P=0.001)。在供體KIR單倍型模式中,供體K

9、IR基因型為Bx1者預(yù)后最差,和供體KIR基因型為其他Bx類型比較,其OS(100.0％vs.64.5％; P=0.0013)和RFS(100.0％vs.62.2％;P=0.0005)明顯降低。而Bx1基因型的B單倍體位于端粒端,故進一步分析KIR的B單倍體位于端粒端和著絲粒端時對預(yù)后的影響。結(jié)果顯示當供體KI R含有著絲粒端的B單倍體(Cen-B)時,移植的預(yù)后較好,OS(96.6％vs.72.0％;P=0.0169)和RFS(96.

10、9％vs.61.3％; P=0.0056)明顯提高,且復(fù)發(fā)率明顯下降(2.9％vs.15.7％; P=0.047)。
　　同胞HLA全相合造血干細胞移植CMV感染率為34.2％(75/219),中位感染時間為62天(26~265天),其中CMV病毒血癥發(fā)生率為4.6％(10/219),3例患者發(fā)生CMV肺炎。供受體KIR基因相合組中受體移植后CMV激活發(fā)生率35.6％(47/132),不合組CMV激活發(fā)生率32.2％(28/87)

11、,兩組間無統(tǒng)計學差異(P=0.663)。供體KIR基因為A/A型,受體移植后CMV激活發(fā)生率39.5％(49/124),供體KIR基因為A/B型,CMV激活發(fā)生率30.3％(23/76),供體KIR基因為B/B型,CMV激活發(fā)生率15.8％(3/19)。供體KIR基因為A/A型與B/B型比較,兩者有統(tǒng)計學意義(P=0.036)。供體KIR含Tel-B時,移植后CMV激活發(fā)生率為24.4％(20/82),明顯低于供體無Tel-B時CMV激

12、活率40.1％(55/137)(P=0.017)。
　　多因素分析提示供體KIR含Cen-B時OS(HR,8.293;95％ CI,1.072–64.169;P=0.043)和RFS(HR:11.63;95％CI,1.51–89.566;P=0.018)明顯提高,其作用主要體現(xiàn)在對復(fù)發(fā)的保護作用(HR,4.363;95％CI;1.184–16.08;P=0.027)。而受體HLA為C2是發(fā)生急性GVHD的危險因素(HR:0.316

13、,95％CI:0.160–0.625,P=0.001)。分析KIR基因在ALL和CML患者移植的預(yù)后,其作用無統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論:同胞全相合造血干細胞移植是治療惡性血液病的重要手段,但移植的預(yù)后卻存在很大差異。本研究對KIR基因B單倍體進行著絲粒及端粒端分析,并第一次分析其對同胞HLA全相合造血干細胞移植預(yù)后的影響,結(jié)果提示供體KIR含有Cen-B時對復(fù)發(fā)有保護作用,從而提高生存率,改善預(yù)后。供受體KIR基因不合可改善同胞全相

14、合造血干細胞移植的預(yù)后。在KIR/HLA受配體缺失模式中,受體HLA為C2是發(fā)生急性GVHD的危險因素。而上述KIR的作用在AML患者中效果更顯著。
　　第三部分建立KIR/HLA受配體缺失體外模式及激活性KIR2DS4基因高表達的機制研究
　　目的:建立體外KIR-A/A型的自然殺傷(NK)細胞與樹突狀細胞(DC)共培養(yǎng)的模型,分析aKIR2DS4高表達的機制。
　　方法:檢測受體HLA分型,分為HLA-C1組(C1

15、/C1)和C2組(C1/C2和C2/C2),在分選供體NK細胞前5-7天進行受體外周血單個核細胞衍生而來的DC培養(yǎng);檢測供體KIR基因,挑選KIR基因型為AA-1或AA-2的供體為實驗組,KIR-A/B(2DS4 Ful或Ful/Del)為對照組,分選供體CD3–CD16+CD56+NK細胞與DC共培養(yǎng)16-24小時,觀察結(jié)果。
　　結(jié)果:供體NK細胞與受體DC細胞共培養(yǎng)后,當濃度達2.5:1及以上時,2DS4表達增高。在KIR-

16、A/A組中,當NK細胞:DC細胞濃度達2.5:1及以上時,與NK(加IL-2)比較,2DS4表達明顯升高(P=0.002),而在KIR-A/B組中無此規(guī)律。供體為KIR-AA-1者NK細胞表面2DS4陽性率(74.4±14.8)％,AA-2者2DS4陽性率(37.7±30.6)％,兩者有統(tǒng)計學差異(P=0.030)。當NK細胞與DC細胞按2.5:1共培養(yǎng)后,AA-1者2DS4表達升高(P=0.006),按5:1共培養(yǎng)后,AA-1者2DS

17、4表達升高(P=0.003);AA-2者NK細胞與DC細胞按5:1共培養(yǎng)后2DS4表達也有升高(P=0.027)。NK細胞與C1組DC細胞共培養(yǎng)后,與NK(加IL-2)組相比,2DS4表達明顯升高(P=0.009),而與C2組DC細胞共培養(yǎng)后,2DS4表達略有升高,但無統(tǒng)計學意義(P=0.435)。
　　結(jié)論:本實驗成功建立了KIR/HLA缺失的體外模型,并且證實當KIR/HLA發(fā)生錯配時,活化型受體CD3–CD16+CD56+N