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文檔簡介
1、靈芝(Ganoderma lucidum(Leyss. exFr.) Karst)是多孔菌科靈芝屬的一種藥用真菌,始記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,現(xiàn)收載于《中國藥典》一部(2015版)。靈芝具有多種功效,可用于免疫紊亂、腫瘤、高血壓、慢性肝炎、腎炎、胃潰瘍等疾病的防治。靈芝具有多種活性物質(zhì),其中以靈芝多糖的研究最為廣泛深入。但由于靈芝多糖結(jié)構(gòu)復(fù)雜、溶解性差等原因,阻礙了靈芝多糖生物活性及靈芝產(chǎn)品深入開發(fā)研究。因此,本研究擬以靈芝子實體為研究對象
2、,對靈芝多糖的提取工藝及靈芝茶的質(zhì)量控制開展了一系列深入研究,為進(jìn)一步驗證靈芝多糖的藥理活性、促進(jìn)靈芝相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)研究提供更為深入的科學(xué)依據(jù)。
圍繞上述科研目標(biāo),本文主要從以下幾個方面開展研究:首先,以2015版《中國藥典》中收載的靈芝正品——赤芝為研究對象,采用酶輔助超聲波-微波聯(lián)用提取法,以靈芝多糖得率為評價指標(biāo),優(yōu)化得出靈芝多糖的最佳提取工藝;其次,通過Sevag法除蛋白、DEAE-52離子交換纖維素柱層析、Sepha
3、dex G-100葡聚糖凝膠柱層析對靈芝粗多糖的進(jìn)行分離純化,最終得到多糖純化組分,并采用HPLC-RID、HPLC-DAD、FT-IR等方法對多糖純化組分進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征;最后,對靈芝產(chǎn)品——靈芝茶的生產(chǎn)工藝及質(zhì)量控制方法進(jìn)行研究,獲取靈芝茶的最佳生產(chǎn)工藝參數(shù),并制訂靈芝茶質(zhì)量控制方法。取得主要研究成果如下:
(1)基于酶輔助超聲波-微波聯(lián)用提取法的靈芝多糖提取工藝研究
為了獲取靈芝多糖的最佳提取工藝參數(shù),本研究以赤芝
4、為研究對象,以多糖得率為評價指標(biāo),采用酶輔助超聲波-微波聯(lián)用提取法提取靈芝多糖。通過對酶的篩選,提取條件單因素試驗考察,結(jié)合響應(yīng)曲面設(shè)計,對靈芝多糖提取工藝進(jìn)行系統(tǒng)的優(yōu)化研究。研究結(jié)果顯示,對靈芝多糖提取效果最好的生物酶為纖維素酶、半纖維素酶和果膠酶的復(fù)合酶(比例為1:1:1)。在此基礎(chǔ)上,根據(jù)Box-Behnken中心組合設(shè)計原理,建立了靈芝多糖得率與超聲時間、酶活力、溶劑用量及酶解溫度的二次多項式數(shù)學(xué)模型,得到最佳提取工藝參數(shù)為:超
5、聲時間為49min,酶活力為1000U,溶劑用量為22mL,酶解溫度為38℃。在此工藝參數(shù)下,靈芝多糖得率高于傳統(tǒng)熱水提取法106.9%。
(2)靈芝多糖的分離純化及結(jié)構(gòu)表征
以靈芝粗多糖為研究對象,采用Sevag法、DEAE-52離子交換纖維素、Sephadex G-100葡聚糖凝膠對靈芝粗多糖進(jìn)行分離純化,最終得到多糖的純化組分,并采用HPLC-RID、HPLC-DAD、FT-IR等方法對多糖純化組分進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征
6、。研究結(jié)果顯示,靈芝粗多糖經(jīng)分離純化處理后,最終得到三種多糖純化組分GLP-D1-1、GLP-D2-1和GLP-D2-2。通過HPLC-RID分析,發(fā)現(xiàn)組分三種多糖組分均具有均一的分布特性,其重均相對分子量(Mw)分別為6.542×104 Da、2.007×105Da、1.055×105Da。通過HPLC-DAD分析結(jié)果表明,GLP-D1-1的單糖組成及摩爾比例為D-甘露糖:鼠李糖:D-半乳糖醛酸:葡萄糖:D-半乳糖:L-巖藻糖=6.8
7、9:1.00:0.05:16.32:8.53:0.80;GLP-D2-1的單糖組成及摩爾比例為D-甘露糖:鼠李糖: D-葡萄糖醛酸: D-半乳糖醛酸:葡萄糖: D-半乳糖: L-巖藻糖=1.54:1.00:0.01:8.59:0.98:0.17;GLP-D2-2的單糖組成及摩爾比例為D-甘露糖:鼠李糖:葡萄糖:D-半乳糖=0.77:1.00:11.28:0.66。通過FT-IR紅外光譜分析,發(fā)現(xiàn)三種多糖組分都具有典型的多糖特征鍵及葡聚糖
8、特有光譜信號,且組分GLP-D2-1和 GLP-D2-2可能為β-型葡聚糖。
?。?)靈芝茶的生產(chǎn)工藝及質(zhì)量控制研究
采用單因素結(jié)合響應(yīng)曲面設(shè)計優(yōu)化研究靈芝茶的生產(chǎn)工藝,得出靈芝茶的最佳生產(chǎn)工藝參數(shù)為:靈芝提取物用量0.93g,烘烤時間61min,烘烤溫度79℃。以此配方制備的靈芝茶在響應(yīng)面法中感官評價得分預(yù)測最大值為87.2,實測值為86.1,比市售的靈芝茶得分(75.6)高出10分以上。
采用超高效液相色
9、譜串聯(lián)質(zhì)譜法建立靈芝茶中靈芝酸A和靈芝酸B含量測定方法。該方法中,靈芝酸A濃度在0.0513~0.5130μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平均回收率為99.57%(RSD=2.74%,n=9);靈芝酸B濃度在0.0208~0.1247μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平均回收率為101.9%(RSD=1.08%,n=9)。采用紫外分光光度法建立了靈芝茶中茶多酚和多糖含量測定方法,該方法中,沒食子酸濃度在4.08~16.50μg·mL-
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