鋅指蛋白ZBTB20及B細(xì)胞異?；罨cSLE發(fā)病的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　通過檢測鋅指蛋白ZBTB20在SLE患者B淋巴細(xì)胞中的表達(dá)情況并分析其與 B細(xì)胞分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子 Blimp-1的關(guān)系，同時(shí)檢測狼瘡小鼠體內(nèi) ZBTB20的表達(dá)，探究ZBTB20與SLE發(fā)病的相關(guān)性。
　　方法:
　?。?）收集36例初診未經(jīng)治療的 SLE患者和30例正常對照者外周血，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）。
　?。?）采用磁珠分選法提取PBMCs中的CD19+B細(xì)胞，并用RT-PCR技術(shù)

2、檢測CD19+B細(xì)胞中ZBTB20 mRNA與Blimp1 mRNA的表達(dá)水平（以-△△Ct值表示）；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測另一管PBMCs中B細(xì)胞亞群比例。
　?。?）分析 SLE患者外周血 B細(xì)胞 ZBTB20 mRNA的表達(dá)與 B細(xì)胞亞群（包括 CD19+B細(xì)胞， CD19-CD138+漿細(xì)胞）比例變化的關(guān)系，與 Blimp1 mRNA表達(dá)及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)抗ds-DNA抗體及免疫球蛋白IgG的相關(guān)性。
　?。?）狼瘡模型 MR

3、L/lpr小鼠、NZB/WF1小鼠培養(yǎng)至25-28周發(fā)病最嚴(yán)重期，并以同周期的正常對照 C57BL/6小鼠作為對照，ELISA法檢測各組小鼠血清中抗ds-DNA抗體及免疫球蛋白IgG水平。
　　（5）取出小鼠的脾臟，淋巴結(jié)，及胸腺，各組織其中一部分用于制備石蠟切片用于免疫組化檢測 ZBTB20陽性表達(dá)，另一部分用于提取總 RNA，RT-PCR檢測ZBTB20 mRNA、Blimp-1 mRNA的表達(dá)水平（以-△△Ct值表示）。

4、r>　　結(jié)果:
　?。?）ZBTB20 mRNA在SLE患者組外周血CD19+ B細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯高于正常對照組[(1.106±0.161) vs(2.527±0.355)， P<0.05]；且 SLE患者組Blimp1 mRNA的表達(dá)也明顯高于正常對照組[(1.106±0.161) vs(2.527±0.355)， P<0.05]；
　?。?）與對照組相比，SLE患者外周血 B細(xì)胞亞群比例發(fā)生變化，其中CD19+B細(xì)胞

5、比例降低[(4.87±3.49) vs(6.92±3.85)，P<0.05]，而CD19-CD138+漿細(xì)胞比例和漿細(xì)胞/B細(xì)胞之間的比值均較對照組顯著增高[(0.49±0.41) vs(0.27±0.25)， P<0.05；(0.14±0.05) vs(0.03±0.03)， P<0.05]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?。?）SLE患者B細(xì)胞ZBTB20 mRNA表達(dá)與CD19-CD138+漿細(xì)胞比例和漿細(xì)胞/ B細(xì)胞比值呈正比[（

6、r=0.165,P=0.028）,（r=0.225，P=0.021）]，與B細(xì)胞中Blimp1 mRNA的表達(dá)呈明顯的正相關(guān)性（r=0.112，P=0.039）；
　　SLE患者 ZBTB20 mRNA的表達(dá)與血清中抗 ds-DNA抗體，免疫球蛋白IgG水平呈明顯正相關(guān)[（r=0.415，P=0.007）,（r=0.507，P=0.005）]。
　?。?）MRL/lpr小鼠、NZB/WF1小鼠處于發(fā)病嚴(yán)重期，脾臟、淋巴結(jié)及胸

7、腺均有不同程度的腫大，血清中抗 ds-DNA抗體，免疫球蛋白 IgG均較對照組增高[(5.27±3.79) vs(0.71±0.65)， P<0.05；(4.50±2.18) vs(0.71±0.65)， P<0.05）]，[(12.35±7.74) vs(1.68±0.75)，P<0.05；(10.91±6.12) vs(1.68±0.75)， P<0.05）]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明構(gòu)建的小鼠模型符合實(shí)驗(yàn)預(yù)期。
　?。?）MR

8、L/lpr小鼠、NZB/WF1小鼠脾臟中 ZBTB20 mRNA表達(dá)明顯高于正常對照組 C57BL/6小鼠[(0.49±0.41) vs(0.27±0.25)，P<0.05；(0.14±0.05) vs(0.03±0.03)， P<0.05）]，而模型組小鼠淋巴結(jié)及胸腺中ZBTB20 mRNA表達(dá)與對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；且免疫組化的結(jié)果顯示，ZBTB20在狼瘡小鼠 MRL/lpr小鼠、NZB/WF1小鼠脾臟中的表達(dá)與對照組相比陽性

9、表達(dá)率明顯增高[（21.3％vs5.2%），（40.2%vs5.2%）]；而在淋巴結(jié)和胸腺中，ZBTB20的陽性表達(dá)率與對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1．SLE患者外周血 CD19+B細(xì)胞中 ZBTB20 mRNA表達(dá)較對照組明顯增高，且同患者外周血 CD19-CD138+漿細(xì)胞比例成正相關(guān)，與血清中自身抗體水平呈正相關(guān)，因此，ZBTB20可能與SLE發(fā)病有關(guān)；
　　2．SLE患者 ZBTB20 mRN