Ad--HGF促進(jìn)老年大鼠心梗后c-kit陽性心臟干細(xì)胞的增殖與分化及機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　缺血性心臟病因其嚴(yán)重的致死率與極差的預(yù)后引起了極大的重視。在我國，缺血性心臟病死亡率呈明顯上升趨勢，平均為62.5/100，000人，是45歲以上男性和65歲以上女性的主要死亡原因。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2015年我國65歲及以上人口為14434萬人，近十年65歲及以上人口逐年增加，人口老齡化的高峰即將到來。這將導(dǎo)致老年群體中缺血性心臟病尤其是心肌梗死的發(fā)病人數(shù)進(jìn)一步增加。傳統(tǒng)治療方法包括藥物治療、血管介入成形術(shù)和外科冠脈旁路移植術(shù)

2、，這些方法雖然提高了心肌梗死的生存率和生活質(zhì)量，但對壞死心肌作用有限，尤其對彌漫性冠狀動(dòng)脈病變難以奏效，心肌梗死已成為心力衰竭的首要原因。因此，探索老年人心梗后心肌再生修復(fù)的策略尤為重要。C-kit陽性心臟干細(xì)胞(C-kit+CSCs)的發(fā)現(xiàn)為我們修復(fù)損傷的心臟提供了治療方向。C-kit陽性心臟干細(xì)胞具有高度自我更新能力，能夠特異性分化為心臟結(jié)構(gòu)細(xì)胞（心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞）。然而，在老年心肌梗死的心臟中c-kit+CSCs的增

3、殖和分化的調(diào)控機(jī)制仍不清楚。我們前期研究發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞生長因子(HGF)對心梗后心臟具有保護(hù)作用，然而HGF對于老年心梗后c-kit+CSCs的增殖與分化的影響尚不清楚。
　　目的：
　　本研究旨在探討HGF對于老年大鼠心梗后心臟c-kit+CSCs的增殖和分化的影響及潛在的分子機(jī)制。
　　方法：
　　1.應(yīng)用免疫熒光與Western blot技術(shù)分別檢測幼年（2-3天）、中年（6-10月齡）和老年（18-22月齡）

4、大鼠心臟中c-kit+ CSCs的表達(dá)情況與心肌組織中HGF及其磷酸化受體p-Met的表達(dá)水平，進(jìn)而評價(jià)c-kit+ CSCs與HGF在不同年齡大鼠心臟中的表達(dá)水平是否具有相關(guān)性;
　　2.采用冠狀動(dòng)脈左前降支(LAD)結(jié)扎法構(gòu)建老年大鼠的心肌梗死模型，并將腺病毒攜帶的肝細(xì)胞生長因子(Ad-HGF)注射到大鼠心肌梗死的周邊區(qū)，研究Ad-HGF對于c-kit+ CSCs增殖和分化的影響;
　　3.采用Western blot與

5、免疫熒光技術(shù)檢測Ad-HGF對老年大鼠心梗后心肌細(xì)胞壞死性凋亡的影響并進(jìn)一步應(yīng)用壞死性凋亡抑制劑Necrostatin-1(Nec-1)抑制壞死性凋亡，探討其對c-kit+ CSCs增殖與分化的影響;
　　4.采用Western blot、免疫熒光與ELISA技術(shù)研究Ad-HGF對心肌組織及外周血清中高遷移率族蛋白B1(HMGB1)的水平與骨髓中c-kit+干細(xì)胞表達(dá)情況的影響;
　　5.采用免疫熒光、Western blo

6、t、心臟超聲與馬松染色技術(shù)評價(jià)Ad-HGF對老年大鼠心梗后心肌重塑及心臟功能的影響。
　　結(jié)果
　　1.隨著大鼠年齡的增長，其心臟中c-kit+ CSCs與HGF蛋白的表達(dá)水平逐漸降低，并且二者之間呈現(xiàn)出顯著正相關(guān);
　　2.Ad-HGF促進(jìn)了老年大鼠心肌梗死后心臟中c-kit+ CSCs的增殖與分化，并進(jìn)一步促進(jìn)了梗死周邊區(qū)域心肌細(xì)胞的增殖與血管的再生;
　　3.Ad-HGF誘導(dǎo)了老年大鼠心梗后心肌細(xì)胞壞死性凋

7、亡的發(fā)生，提高了心肌組織與外周血中HMGB1蛋白的表達(dá)水平，并增加了骨髓中c-kit+干細(xì)胞的數(shù)量;
　　4.抑制壞死性凋亡減弱了Ad-HGF誘導(dǎo)的老年大鼠心梗后c-kit陽性心臟干細(xì)胞的增殖與分化，減少了梗死周邊區(qū)心肌和血管的再生，同時(shí)降低了心肌組織與外周血中HMGB1蛋白表達(dá)水平及梗死后大鼠骨髓中c-kit陽性干細(xì)胞的數(shù)量;
　　5.Ad-HGF抑制了老年大鼠心梗后心肌細(xì)胞的凋亡，減輕了梗死區(qū)域心肌纖維化的水平，并改善了