TRPV1受體激活對內毒素血癥小鼠急性肺損傷的影響及機制.pdf

1、目的:
　　 研究激活內毒素血癥小鼠TRPV1受體激活和抑制后炎癥指標（TNF-α、IL-6、IL-10和其上游調控因子NF-κB和TLR4以及SP和CGRP）和氧化應激指標(MDA、SOD和CAT以及上游調控指標HO-1和Nrf2)的變化。
　　 方法:
　　 1.取SPF級ICR小鼠108只，雄性，體重18-22克。將小鼠隨機分為6組:正常對照組(n=18)，CAP對照組(n=18)，CAPZ對照組(n=18

2、)，內毒素血癥組(n=18)，CAP干預組(n=18)，CAPZ干預組(n=18);正常對照組:給小鼠腹腔注射生理鹽水，3h、8h、16h后麻醉活殺;CAP、CAPZ對照組:先分別兩組給小鼠皮下注射CAP(1mg/kg)、CAPZ（15mg/kg），30分鐘后腹腔注射生理鹽水，此后分別于3h、8h、16h麻醉后活殺;內毒素血癥組:給小鼠腹腔注射LPS10mg/kg，構建內毒素血癥模型，分別于3h、8h、16h麻醉后活殺;CAP、CAPZ

3、干預組:先分別給兩組小鼠皮下注射CAP(1mg/kg)、CAPZ(15mg/kg)，30分鐘后腹腔注射LPS10mg/ml，分別于3h、8h、16h麻醉后活殺。以上各組麻醉活殺后取肺組織，-70℃保存。
　　 2.觀察各組小鼠在內毒素血癥模型建立后在皮毛、呼吸、活動及精神狀態(tài)方面的改變，光鏡下觀察各組小鼠肺組織病理變化情況，稱取小鼠肺組織重量，求出小鼠肺組織干濕比變化。
　　 3.實驗一:采用ELISA法檢測各組小鼠肺組

4、織TNF-α、IL-6、IL-10以及SP、CGRP水平，RT-PCR法檢測各組小鼠肺組織TLR4mRNA和NF-κ B mRNA水平，Western blotting法檢測各組小鼠肺組織TLR4和NF-κB蛋白的水平。
　　 4.實驗二:采用化學比色法檢測各組小鼠肺組織SOD和CAT活力，以及MDA水平， ELISA法檢測各組小鼠肺組織HO-1水平，RT-PCR法檢測各組小鼠肺組織Nrf2mRNA水平，Western blot

5、ting法檢測各組小鼠肺組織Nrf2的水平。
　　 結果:
　　 1.正常對照組和CAP對照組以及CAPZ對照組小鼠反應靈敏，呼吸平穩(wěn)，黏膜紅潤，皮毛光滑，行動自如，其中CAP組在2h左右開始食欲大增，狂吃不止，CAPZ組食欲變化不明顯。內毒素血癥模型組則在2h左右出現(xiàn)精神萎靡，呼吸急促，倦怠懶動，反應變慢，進食減少，四肢水腫，其中下肢水腫稍重;8h上述癥狀加重，反應遲鈍，可見眼部有較多分泌物，體溫降低，四肢發(fā)抖;16h

6、精神更加萎靡，刺激后無反應，眼部因分泌物較多而無法睜開，口唇發(fā)紺，體溫較低，四肢冰冷。CAP干預組小鼠癥狀較內毒素血癥組明顯減輕，而CAPZ干預組小鼠癥狀稍有加重。
　　 2.光鏡下觀察，正常對照組、CAP對照組以及CAPZ對照組肺組織結構完整清晰，肺泡腔內無炎性細胞浸潤，肺間質無滲出;膿毒癥組8h、16h可見肺泡大小不等，部分肺泡壁斷裂呈氣腫狀，部分肺泡萎陷，肺泡壁增寬，肺泡毛細血管擴張，肺間質見多行核炎癥細胞浸潤;與內毒素血

7、癥組相比，CAP干預組肺泡壁毛細血管擴張、炎細胞浸潤及間質水腫程度明顯減輕;CAPZ干預組無明顯加重。
　　 3.實驗一:
　　 (1)內毒素血癥組小鼠肺組織在3h、8h、16h的TNF-α較正常對照組水平均顯著升高(P＜0.05)，CAP對照組、CAPZ對照組TNF-α、IL-6、IL-10則無明顯變化(P＞0.05);與同時間點內毒素血癥組相比，CAP干預組TNF-α、IL-6水平在3h、8h、16h顯著降低(P＜0

8、.05)，而CAPZ干預組TNF-α、IL-6則顯著升高(P＜0.05)，CAP干預組IL-10水平較內毒素血癥組升高(P＜0.05)，而CAPZ干預組則降低(P＜0.05)。
　　 (2)內毒素血癥組小鼠肺組織在3h、8h、16h SP、CGRP較正常對照組顯著升高，CAP對照組SP、CGRP也有明顯升高(P＜0.05)，但比內毒素血癥組低(P＜0.05)，CAPZ對照組則有明顯降低;與同時間點內毒素血癥組相比，CAP干預組S

9、P、CGRP顯著升高(P＜0.05)，而CAPZ干預組SP、CGRP則顯著降低(P＜0.05)。
　　 (3)內毒素血癥小鼠肺組織在3h、8h、16h TLR4及其mRNA表達水平較正常對照組及其mRNA顯著升高(P＜0.05)，而CAP對照組、CAPZ對照組TLR4及其mRNA表達水平則無明顯變化(P＞0.05); CAP干預組、CAPZ干預組小鼠肺組織TLR4及其mRNA水平變化不明顯(P＞0.05)。內毒素血癥組小鼠肺組織

10、在3h、8h、16h核內NF-κ B表達水平較正常對照組顯著升高(P＜0.05)，而CAP對照組、CAPZ對照組核內NF-κB表達水平則無明顯變化(P＞0.05); CAP干預組核內NF-κ B顯著降低(P＜0.05)，CAPZ干預組核內NF-κ B顯著升高(P＜0.05)。
　　 4.實驗二:
　　 (1)內毒素血癥組小鼠肺組織在3h、8h、16h CAT、SOD活力明顯低于正常對照組(P＜0.05)，且隨時間變化CA

11、T逐漸升高，SOD逐漸降低，CAP對照組、CAPZ對照組CAT、SOD活力則變化不明顯(P＞0.05);與內毒素血癥組相比，CAP干預組CAT、SOD活力在8h、16h明顯升高(P＜0.05)，CAPZ干預組SOD活力則在8h、16h明顯降低(P＜0.05)，CAT則在16h明顯降低(P＜0.05)。內毒素血癥組小鼠肺組織在3h、8h、16h MDA含量明顯高于正常對照組(P＜0.05)，CAP對照組、CAPZ對照組MDA含量則變化不明

12、顯(P＞0.05);與內毒素血癥組相比，CAP干預組MDA含量在3h、8h、16h明顯降低(P＜0.05)，CAPZ干預組MDA含量則在3h、8h、16h明顯降低(P＜0.05)。
　　 (2)內毒素血癥組小鼠肺組織在3h、8h、16h HO-1、Nrf2含量及Nrf2mRNA水平明顯高于正常對照組(P＜0.05)，CAP對照組和CAPZ對照組則無明顯變化(P＞0.05);與內毒素血癥組相比，CAP干預組小鼠肺組織在8h、16h

13、 HO-1、Nrf2含量及Nrf2mRNA水平明顯升高(P＜0.05)，CAPZ干預組小鼠肺組織在8h、16hHO-1、Nrf2含量及Nrf2mRNA水平則明顯降低(P＜0.05)。
　　 結論:
　　 1.TRPV1激活不能降低內毒素血癥小鼠TLR4水平，但能顯著降低核內NF-κ B水平，降低下游TNF-α、IL-6水平，提高IL-10水平，升高SP、CGRP水平，減輕內毒素血癥所致急性肺損傷的炎癥水平。