慢頻率依賴性心律失常發(fā)生機(jī)制及穩(wěn)心顆粒作用機(jī)理研究.pdf

1、文章分為以下部分:
　　第一部分:慢頻率依賴性長QT綜合癥基因機(jī)制研究
　　慢頻率依賴性長QT綜合癥并非由于服用某種藥物引起，該類患者通常以出現(xiàn)心室率突然減慢，QTc間期伴隨性延長，發(fā)作尖端扭轉(zhuǎn)性室速或室顫為特點。搶救時植入臨時起搏器并快速起搏可以縮短QTc間期并終止惡性心律失常發(fā)生。既往研究顯示，慢頻率依賴性長QT綜合癥多由于鉀通道(IKs or IKr)功能減弱引起，但其分子機(jī)制仍不完全明了。
　　目的:
　

2、　本研究對5例慢頻率依賴性長QT綜合癥患者進(jìn)行相關(guān)基因突變位點分析，并且從細(xì)胞水平評估SCN5A基因突變對鈉通道功能的影響，揭示慢頻率依賴性長QT綜合癥的發(fā)病機(jī)理。
　　方法:
　　收集5例慢頻率依賴性長QT綜合癥患者的臨床資料及心電圖信息。經(jīng)同意后抽取患者及其家屬的外周靜脈血，對相關(guān)基因進(jìn)行突變位點篩查。構(gòu)建SCN5A突變體質(zhì)粒，并與野生型SCN5A分別轉(zhuǎn)染進(jìn)入人胚胎腎293(HEK-293)細(xì)胞。使用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)觀察

3、并比較兩組轉(zhuǎn)染細(xì)胞的鈉通道電生理特性。
　　結(jié)果:
　　分析臨床資料顯示，患者年齡范圍在52±22歲，其中4名女性。所有患者均在心率減慢時發(fā)作室顫或尖端扭轉(zhuǎn)性室速，其中4名患有房室傳導(dǎo)阻滯，1名患有竇性心動過緩。經(jīng)過植入起搏器或者帶起搏功能的除顫器后，該心律失常得到抑制。大于70次的快速起搏使QTc間期由583±60ms縮短至470±37ms。我們對5例患者進(jìn)行了心肌病及心律失常相關(guān)基因（包括 KCNQ1，KCNH2，SCN

4、5A，ANK2，KCNE1，KCNE2，CAV3等）的檢測，發(fā)現(xiàn)了10個雜合突變基因，分別是SCN5A(p.S705F)、HCN4(p.R666Q)、Titin(p.R12053W、p.T16515M、p.R4770Q、p.A1868T、p.R18427C、p.I9550M,)、DMD(p.E440K)和SGCD(p.Q283R)。通過對SCN5A S705F基因突變進(jìn)行全細(xì)胞膜片鉗功能分析，結(jié)果顯示:與野生型鈉通道(-241±54 p

5、A/pF, n=7)相比，突變型(-247±90 pA/pF, n=11)并未影響鈉電流密度峰值(P＞0.05)，但是突變型鈉通道的穩(wěn)態(tài)激活曲線出現(xiàn)左移(V1/2mutation vs.V1/2WT，-43.10±1.49 mV vs.-34.97±3.11mV, P＜0.05; Kmutation vs.KWT,4.86±0.49mV vs.6.97±1.40mV, P＞0.05)，野生型鈉通道功能增強(qiáng)。在刺激頻率分別為2Hz，1Hz

6、，0.5Hz時，突變型鈉通道0.5Hz起搏刺激與2Hz相比，INa/peak ratio升高了6.8％。然而野生型鈉通道在3種起搏頻率下，INa/peak ratio保持不變。提示慢頻率時突變通道SCN5A S705F功能增強(qiáng)。
　　結(jié)論:
　　慢頻率依賴性長QT綜合癥可能與多種基因變異相關(guān)。而突變型鈉通道慢頻率依賴性功能增強(qiáng)可以部分解釋該病為何在心率突然減慢時出現(xiàn)惡性心律失常。鈉通道基因突變是慢頻率依賴性長QT綜合癥的致病

7、原因之一。
　　第二部分:穩(wěn)心顆粒作用機(jī)理研究
　　急性心肌梗死發(fā)病率逐年增高，而心肌梗死后發(fā)生心室重構(gòu)是造成梗死后心力衰竭的重要原因，雖然早期灌注治療開通了犯罪血管，拯救了許多人的生命，但其對心梗后心功能的影響仍未可知。研究顯示，心室重構(gòu)是心肌梗死后心臟的一種修復(fù)行為，重構(gòu)的發(fā)生與心肌梗死范圍、梗死后炎癥反應(yīng)、神經(jīng)體液調(diào)節(jié)等緊密相關(guān)。因此，如何能夠減少梗死細(xì)胞范圍，逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu)，減慢心衰進(jìn)程成了人們共同關(guān)注的問題。眾所周知

8、，穩(wěn)心顆粒是用來治療心律失常的一種復(fù)合中藥制劑，其對心肌梗死后心衰的作用仍值得探索。
　　目的:
　　國內(nèi)外關(guān)于中藥穩(wěn)心顆粒分子層面的研究成果報道較少，本研究致力于探索兔心梗模型經(jīng)穩(wěn)心顆粒治療后的基因表達(dá)譜改變和病理改變。
　　方法:
　　將二十只成年雄性兔隨機(jī)分成4組:sham，model，WXKL和captopril。其中，model、WXKL和captopril需在全麻下通過結(jié)扎前降支建立心梗模型，sham

9、只開胸不結(jié)扎。隨后WXKL和captopril分別口服喂養(yǎng)穩(wěn)心顆粒817mg/kg/d和卡托普利8mg/kg/d，其它兩組喂等量純水。四周后，在全麻下做完心臟彩超后，開胸取心臟進(jìn)行基因表達(dá)譜芯片和病理研究(HE，Masson and Tunel)。
　　結(jié)果:
　　穩(wěn)心顆粒可以下調(diào)炎癥相關(guān)基因(CX3CR1，MRC1，and FPR1)，凋亡相關(guān)基因(Cathepsin C and TTC5)，腎素-血管緊張素系統(tǒng)相關(guān)基因(