TRPC參與心肌APD頻率依賴(lài)性及抗心律失常藥物對(duì)TRPC表達(dá)的影響.pdf

1、經(jīng)典瞬時(shí)受體電位通道(transient receptor potential canonical,TRPC)包括七個(gè)家族成員TRPC1-7,是一類(lèi)鈣通透的非選擇性陽(yáng)離子通道,它們與心血管系統(tǒng)疾病關(guān)系密切,在心律失常、竇房傳導(dǎo)阻滯、心肌肥厚、心肌病及心力衰竭中發(fā)揮作用。本實(shí)驗(yàn)旨在研究TRPC家族是否參與APD頻率依賴(lài)性及抗心律失常藥物對(duì)TRPC蛋白表達(dá)的影響。
　　第一部分，TRPC參與豚鼠心室乳頭肌APD頻率依賴(lài)性
　　目

2、的:
　　觀察不同頻率刺激下豚鼠右心室乳頭肌動(dòng)作電位APD的變化是否存在頻率依賴(lài)性,并測(cè)定不同刺激頻率下TRPC蛋白表達(dá)量是否變化。
　　方法:
　　采用標(biāo)準(zhǔn)微電極細(xì)胞內(nèi)跨膜動(dòng)作電位記錄技術(shù),記錄不同刺激頻率(0.2Hz、0.5Hz、1Hz、2Hz、3Hz、4Hz、4.5Hz、5Hz)下,乳頭肌APD的變化情況。運(yùn)用Westernblot的方法,測(cè)定1Hz、3Hz、4.5Hz頻率下乳頭肌標(biāo)本內(nèi)TRPC蛋白表達(dá)量。

3、>　　結(jié)果:
　　1.在刺激頻率為0.2Hz、0.5Hz、1Hz、2Hz、3Hz、4Hz、4.5Hz、5Hz的情況下,隨著刺激頻率的增加,乳頭肌跨膜動(dòng)作電位APD逐漸縮短,呈現(xiàn)明顯的頻率依賴(lài)性。
　　2.與1Hz組相比,3Hz刺激下豚鼠右心室乳頭肌動(dòng)作電位復(fù)極至50％、90%的時(shí)程(APD50、APD90)分別縮短(40.1±8.2)%、(33.7±6.3)%;4.5Hz刺激下豚鼠右心室乳頭肌動(dòng)作電位復(fù)極至50%、90%的時(shí)

4、程(APD50、APD90)分別縮短(47.2±9.5)%、(44.1±7.3)%。
　　3.與1Hz組相比,3Hz組和4.5Hz組乳頭肌TRPC1、TRPC3、TRPC6表達(dá)量均有顯著下降,并表現(xiàn)出相應(yīng)的頻率依賴(lài)性特點(diǎn),即隨著刺激頻率的增大,TRPC1、3、6的表達(dá)量遞減。
　　小結(jié):
　　再次證實(shí)豚鼠心室乳頭肌心肌細(xì)胞動(dòng)作電位時(shí)程存在頻率依賴(lài)性特征。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),隨刺激頻率的增加,除心肌動(dòng)作電位時(shí)程縮短外,同時(shí),TR

5、PC蛋白表達(dá)量也隨之改變,提示TRPC參與心肌APD頻率依賴(lài)性。
　　第二部分，抗心律失常藥物對(duì)TRPC蛋白表達(dá)量的影響
　　目的:
　　觀察不同種類(lèi)抗心律失常藥物作用的頻率依賴(lài)性方式(特點(diǎn)),并觀察抗心律失常藥物對(duì)TRPC蛋白表達(dá)量是否影響。
　　方法:
　　采用標(biāo)準(zhǔn)微電極細(xì)胞內(nèi)跨膜動(dòng)作電位記錄技術(shù),記錄Nef、AM、Qd給藥前后對(duì)乳頭肌動(dòng)作電位復(fù)極至50%、90%的時(shí)程(APD50、APD90)的影響。

6、采用Westernblot的方法測(cè)定不同給藥組和對(duì)照組乳頭肌標(biāo)本的TRPC蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果:
　　1.在刺激頻率分別為1Hz、3Hz、4.5Hz的條件下,Nef30μmol/L、AM10μmol/L、Qd5μmol/L均可延長(zhǎng)豚鼠右心室乳頭肌的APD,但延長(zhǎng)的相對(duì)百分比(ΔAPD/APD)不同。1、3、4.5Hz下,與給藥前相比,Nef30μmol/L延長(zhǎng)APD90百分比分別為(4.3±2.4)%、(14.3±3.6)

7、%和(28.5±6.2)%,表現(xiàn)出順頻率依賴(lài)性的特點(diǎn);AM10μmol/L延長(zhǎng)APD90百分比分別為(17.1±2.4)%、(19.5±3.5)%、(15.9±6.7)%,表現(xiàn)為非頻率依賴(lài)性特點(diǎn);Qd5μmol/L延長(zhǎng)APD90百分比分別為(13.3±3.1)%、(5.7±1.7)%、(3.6±1.5)%,表現(xiàn)出逆頻率依賴(lài)性特點(diǎn)。
　　2.與對(duì)照組相比,Nef、AM、Qd給藥組均影響乳頭肌TRPC1、TRPC3、TRPC6表達(dá)量,

8、其中Nef組明顯增加TRPC蛋白表達(dá)。
　　小結(jié):
　　1.各種抗心律失常藥以不同頻率依賴(lài)性方式(特點(diǎn))影響心肌動(dòng)作電位時(shí)程的頻率依賴(lài)性,Nef30、AM10和Qd5μmol/L延長(zhǎng)心肌APD的作用,分別表現(xiàn)為順頻率、非頻率、逆頻率依賴(lài)性特點(diǎn)。
　　2.不同種類(lèi)的抗心律失常藥物均可影響TRPC蛋白的表達(dá),Nef30μmol/L顯著增加TRPC1、3、6蛋白表達(dá),與對(duì)照組相比,分別是其2.26倍、2.32倍、2.34倍。