PKM2和USP18在食管鱗癌組織中的表達及臨床病理意義.pdf

1、背景與目的
　　食管癌在全球惡性腫瘤中排名第四位，病理類型以鱗狀細胞癌（ squamous cell carcinoma，SCC）最為多見。據大數據統(tǒng)計報道，食管癌的5年生存率在30％左右（15%～42%）。我國河南省林縣是食管癌的高發(fā)區(qū)，相對于其他惡性上皮源性的腫瘤，該區(qū)域的食管癌死亡率明顯高于全國平均水平。
　　就腫瘤的發(fā)病機制來講，腫瘤的異質化是由多元素導致的，例如外界化學物質刺激、基因突變、內環(huán)境紊亂或者是機體自身正

2、常代謝停滯、異常代謝活躍等。某種因子在機體代謝活動中生成增多會影響正常的代謝過程，導致在細胞水平或者是基因水平上對整個機體的穩(wěn)態(tài)構成威脅，進而出現腫瘤樣變。因此，確定腫瘤基因突變位點是研究腫瘤發(fā)展進程的關鍵。M2型丙酮酸激酶（pyruvate kinase M2，PKM2）作為糖酵解途徑中最重要的調節(jié)酶，能夠對糖酵解過程產生的大分子物質的數量起到了關鍵性的掌控作用，同時為腫瘤細胞的生長代謝提供了所需的能量和原料，也對腫瘤細胞的生長周期起

3、到了調控作用。泛素特異性蛋白酶18（Ubiquitin specific protease18，USP18）作為一種干擾素誘導基因，在人體內環(huán)境中主要扮演去泛素化的作用，受損組織被機體識別后會與ISG15（類泛素干擾素刺激基因）形成泛素化復合物，進而被吞噬細胞或水解酶降解清除。而USP18阻斷ISG15發(fā)揮泛素化作用，進而防止損傷的靶細胞被吞噬細胞降解或被水解酶水解，導致?lián)p傷細胞在體內堆積不能及時清除，使腫瘤細胞處在營養(yǎng)豐富的環(huán)境內，達

4、到促進腫瘤異質化進程的效果，進而對腫瘤的生長代謝起到推動作用。
　　近年來尋找生物學標記物成為了了解食管癌的腫瘤發(fā)病機制以及探索食管癌的早期篩查指標和靶向治療位點的研究熱點，既能在探索食管癌發(fā)生發(fā)展的同時對食管癌做出早期診斷，又能進行靶向對癥治療以提高生存率。明確腫瘤的突變點能夠從根本上遏制食管癌的發(fā)生，也能夠從分子角度扭轉腫瘤的單克隆現象，促進有腫瘤化趨勢的細胞發(fā)生凋亡，調節(jié)正常細胞進行常規(guī)的新陳代謝。進而，能夠響應“早發(fā)現、早

5、診斷、早治療”的醫(yī)療目標，對于提高食管癌患者的生存率、減少患者的致死率起到決定性的作用，也對食管癌的臨床治療效果和結局起到顯著改善和指導的效果。
　　本研究通過免疫組織化學法觀察PKM2和USP18在食管鱗狀細胞癌組織、正常食管黏膜組織以及食管鱗狀上皮內瘤變組織（低級別和高級別）中的表達情況，以及分析在不同分化程度、浸潤深度、年齡、性別、淋巴結轉移等情況下的食管鱗癌組織中的差異性表達狀況，觀察其表達差異性是否與食管鱗狀上皮的異型增

6、生的進程以及各臨床指標有關，對于探討PKM2和USP18在推進食管癌發(fā)生過程中的作用有很大的幫助作用。
　　方法
　　1.篩選60例于2015年01月～2015年12月間由鄭州大學第一附屬醫(yī)院病理科診斷為食管鱗狀細胞癌的病例，其中高分化、中分化、低分化鱗狀細胞癌組織各20例。病例標本均為手術切除后的食管大標本，經常規(guī)病理取材，病理報告中有明確的腫物大小、位置、分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移以及切緣是否取干凈等情況。另外選取6

7、0例正常食管黏膜組織，以及60例經ESD或EMR切除后診斷為鱗狀上皮內瘤變的組織，其中高級別、低級別鱗狀上皮內瘤變組織各30例。
　　2.實驗運用免疫組織化學技術對食管鱗癌組織、食管鱗狀上皮內瘤變組織以及正常食管黏膜組織進行USP18和PKM2的染色，嚴格按照SP免疫組化二步染色法的步驟進行。免疫標記物 PKM2的陽性對照采用胃腺癌組織，免疫標記物USP18的陽性對照采用肝癌組織，兩者陽性染色位于細胞核和細胞質中，陰性對照均為不加

8、一抗染色的食管鱗癌組織。
　　3.統(tǒng)計學處理：運用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析處理，對癌組織、食管鱗狀上皮內瘤變組織、正常食管黏膜組織以及不同臨床指標下的食管癌組織進行獨立的兩組二分類和多組二分類比較，檢驗水準α=0.05。
　　結果
　　1、PKM2在食管鱗癌組織、食管鱗狀上皮內瘤變組織以及正常食管黏膜組織中的陽性表達率分別為63.3%、30%、11.7%，且3組間比較，差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=36.19，P＜

9、0.05）?？梢?，PKM2在食管鱗癌組織中的表達顯著高于其在食管鱗狀上皮內瘤變組織以及食管正常黏膜組織中的表達。另外在低級別和高級別鱗狀上皮內瘤變組織中PKM2的表達陽性率分別是16.7%和43.3%，差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=5.08，P＜0.05）。
　　2、USP18在食管鱗癌組織、食管鱗狀上皮內瘤變組織以及正常食管黏膜組織中的陽性表達率分別為65%、31.7%、3.3%，3組間比較，差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=51.45，P

10、＜0.05）?？梢?，USP18在食管鱗癌組織中的表達程度也是明顯高于其在食管鱗狀上皮內瘤變組織以及正常食管黏膜組織中的表達。USP18在低級別和高級別鱗狀上皮內瘤變組織中的陽性表達率分別為23.3%和40.0%，雖然陽性表達有逐漸增加的趨勢，但是與PKM2不同，USP18在低級別和高級別鱗狀上皮內瘤變組織中的陽性表達差異性很小，差異無統(tǒng)計學意義（χ2=1.93， P>0.05）。
　　3、將診斷為食管鱗癌的病例根據不同的臨床指標（