慢性阻塞性肺疾病差異表達microRNAs及其臨床意義.pdf

1、目的:通過芯片數(shù)據(jù)庫篩選COPD外周血差異表達miRNAs，運用生物信息學分析方法將差異表達較顯著的miRNAs進行靶基因預(yù)測、GO和Pathway分析。在此基礎(chǔ)上，運用qRT-PCR方法將候選miRNAs在臨床COPD患者外周血單個核細胞中進行驗證，并分析差異miRNAs的臨床意義。
　　方法:1、運用數(shù)據(jù)庫中芯片數(shù)據(jù)分析COPD外周血miRNAs表達譜，將異常表達的miRNAs與另外一個獨立樣本qPCR數(shù)據(jù)中的差異miRNAs

2、取交集，篩選出COPD異常表達的miRNAs。2、運用TargetScan、PicTar、miRDB及Tarbase等多種軟件預(yù)測和篩選候選miRNAs的靶基因，將預(yù)測靶基因取交集，進一步與經(jīng)實驗驗證的靶基因取并集，并將得出的上述靶基因進行GO和Pathway分析。3、將臨床研究對象分為COPD組和健康對照組，收集各組研究對象的外周血及臨床資料。運用qRT-PCR的實驗方法檢測外周血單個核細胞miR-23a、miR-25、miR-145

3、、miR-224的相對表達水平，分析兩組間的表達差異，并進一步分析miRNAs表達水平與GOLD分級及急性加重頻率間的關(guān)系。4、對差異表達miRNAs進行ROC分析。
　　結(jié)果:1、芯片數(shù)據(jù)中COPD與健康對照間差異表達的miRNAs共249個(P＜0.05)，其中COPD中表達水平較健康對照升高的98個，較健康對照降低的151個，在上述miRNAs中選擇表達差異較顯著的4個miRNAs在另一獨立樣本qPCR數(shù)據(jù)中進行驗證，結(jié)果顯

4、示miR-23a、miR-25、miR-145、miR-224在兩組間均為差異表達。2、通過生物信息學分析方法篩選出4個miRNAs的總靶基因共3114個，進一步GO功能分析顯示上述靶基因主要與細胞增殖、分化、凋亡、信號轉(zhuǎn)導、脂質(zhì)代謝、氧化還原等重要生物學過程相關(guān)，Pathway分析主要與MAPK、Wnt、TGF-β、Notch、T細胞受體、B細胞受體等重要信號通路相關(guān)。上述miRNAs靶基因相關(guān)的功能和通路與COPD發(fā)病機制密切相關(guān)。

5、3、共收集臨床健康對照組30名及COPD組50名研究對象，其中COPD組患者FEV1％pre與BMI、吸煙指數(shù)、mMRC及CAT評分相關(guān)。qRT-PCR結(jié)果顯示miR-23a、miR-25、miR-145、miR-224的相對表達水平在COPD組外周血單個核細胞中較健康對照組均降低，與GOLD分級相關(guān)，且miR-23a與miR-145在COPD非頻繁加重及頻繁加重患者的表達水平有統(tǒng)計學差異。4、ROC分析結(jié)果顯示聯(lián)合檢測miR-25、m

6、iR-145、miR-224具有較高的AUC，有望成為COPD的預(yù)測指標。
　　結(jié)論:1、COPD差異表達miRNAs（miR-23a、miR-25、miR-145、miR-224）可能在COPD發(fā)病機制相關(guān)的功能和信號通路中發(fā)揮重要作用。2、臨床COPD患者外周血單個核細胞中miR-23a、miR-25、miR-145、miR-224的相對表達水平較健康對照低，在COPD患者中與GOLD分級相關(guān)，且miR-23a和miR-145