Sigma-1R對(duì)缺血性腦卒中周細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)及機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　闡明sigma-1R對(duì)缺血性腦卒中周細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究，為sigma-1R作為缺血性腦卒中潛在治療靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　應(yīng)用6-8周齡C57BL/6J和sigma-1R KO雄性小鼠，用光栓法制備永久性大腦中動(dòng)脈栓塞(permanent middle cerebral artery occlusion，pMCAO)模型。pMCAO模型24 h后應(yīng)用核磁共振成像(magnetic re

2、sonance imaging，MRI)和2，3，5-氯化三苯基四氮唑（2，3，5-triphenyltetrazolium chloride，TTC）染色測(cè)定腦梗死體積;神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分測(cè)定神經(jīng)功能損傷水平;伊文斯蘭滲漏實(shí)驗(yàn)測(cè)定血腦屏障完整性;電鏡和免疫熒光染色觀察血管的完整性;Western Blot檢測(cè)缺血核心區(qū)緊密連接蛋白、周細(xì)胞標(biāo)記分子、凋亡蛋白及自噬蛋白表達(dá);采用氧糖剝奪(oxygenglucose deprivation，O

3、GD)模型處理周細(xì)胞細(xì)胞系C3H/10T1/2(C3H)細(xì)胞和小鼠原代周細(xì)胞0h、1h、3h、6h、12 h、24 h后，應(yīng)用噻唑藍(lán)(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT）法檢測(cè)周細(xì)胞細(xì)胞活力，應(yīng)用Western Blot檢測(cè)周細(xì)胞標(biāo)記分子、凋亡蛋白及自噬蛋白表達(dá)。應(yīng)用自噬阻斷劑3-MA及自噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素處理周細(xì)胞，觀察自噬對(duì)OGD所

4、致周細(xì)胞凋亡的影響;應(yīng)用sigma-1R激動(dòng)劑PRE084及阻斷劑BD1047處理周細(xì)胞，觀察sigma-1R對(duì)OGD所致周細(xì)胞凋亡的影響，以及sigma-1R與自噬的關(guān)系。應(yīng)用MTT法考察新型sigma-1R高親和力化合物對(duì)OGD所致原代周細(xì)胞和原代神經(jīng)元細(xì)胞活力的影響，同時(shí)在pMCAO和短暫性大腦中動(dòng)脈栓塞(transient middle cerebral artery occlusion，tMCAO)腦卒中小鼠模型上通過TTC，

5、MRI，伊文斯蘭滲漏實(shí)驗(yàn)和Western Blot等手段進(jìn)行藥效驗(yàn)證。
　　結(jié)果:
　　整體水平結(jié)果表明，敲除sigma-1R加重pMCAO模型小鼠腦缺血損傷，增加腦梗死體積和神經(jīng)功能障礙;加重pMCAO模型小鼠血腦屏障破壞;促進(jìn)pMCAO模型小鼠缺血核心區(qū)細(xì)胞的凋亡和自噬;離體水平進(jìn)一步驗(yàn)證，OGD處理C3H細(xì)胞和原代周細(xì)胞呈時(shí)間依賴性地引起細(xì)胞凋亡和自噬;進(jìn)一步研究抑制自噬能夠減少OGD引起C3H細(xì)胞和原代周細(xì)胞的凋亡，

6、而激活自噬能夠促進(jìn)細(xì)胞凋亡;激活sigma-1R能夠減少OGD所致C3H細(xì)胞和原代周細(xì)胞的凋亡，而阻斷sigma-1R能促進(jìn)周細(xì)胞的凋亡;激活sigma-1R能減少OGD所致C3H細(xì)胞和原代周細(xì)胞的自噬，而阻斷sigma-1R能增加C3H細(xì)胞和原代周細(xì)胞的自噬。在上述研究基礎(chǔ)上，我們自主合成系列sigma-1R激動(dòng)劑，其中化合物M1能夠有效減少pMCAO模型小鼠和tMCAO模型小鼠的腦缺血損傷。
　　結(jié)論:
　　本研究發(fā)現(xiàn)激