高糖誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞JAK2-STAT3激活并增強(qiáng)共培養(yǎng)神經(jīng)元Cav-1及NR2B的表達(dá).pdf

1、目的：
　　通過觀察高糖培養(yǎng)下BV2細(xì)胞中p-JAK2、p-STAT3的表達(dá)變化以及PC12細(xì)胞中p-Cav-1、p-NR2B的表達(dá)變化，探討高糖對于小膠質(zhì)細(xì)胞以及神經(jīng)元的影響，以及JAK2/STAT3-Cav-1-NR2B信號通路在糖尿病神經(jīng)病理性疼痛中的作用。
　　方法：
　　1.高糖刺激BV2細(xì)胞，將BV2細(xì)胞分為2組：正常組（C組）、高糖組（H組），分別給予低糖培養(yǎng)基（糖濃度為5.5mmol/L）、高糖培養(yǎng)基（

2、糖濃度為33.3mmol/L）、培養(yǎng)24h后，采用蛋白免疫印跡（Western blotting）檢測BV2細(xì)胞中p-JAK2、p-STAT3的表達(dá)變化。
　　2.給予JAK2抑制劑AG490，將BV2細(xì)胞分為4組：正常組（C-1組）、高糖組（H-1組）、抑制劑組（AG490-1組）、溶劑對照組（SC-1組），分別給予低糖培養(yǎng)基（糖濃度為5.5mmol/L）、高糖培養(yǎng)基（糖濃度為33.3mmol/L）、高糖培養(yǎng)基+AG490（50

3、μmol/L）、高糖培養(yǎng)基+DMSO進(jìn)行培養(yǎng)，24h后，采用蛋白免疫印跡（Western blotting）檢測BV2細(xì)胞中p-JAK2、p-STAT3的表達(dá)變化。
　　3.利用transwell小室構(gòu)建BV2細(xì)胞和PC12細(xì)胞共培養(yǎng)體系，隨機(jī)分為5組：正常組（C-2組）、高糖組（H-2組）、抑制劑組（AG490-2組）、溶劑對照組（SC-2組）以及高糖對照組（HC-2組），前四組共培養(yǎng)體系分別給予低糖培養(yǎng)基、高糖培養(yǎng)基、高糖培養(yǎng)

4、基+AG490（50μmol/L）、高糖培養(yǎng)基+DMSO，HC-2組僅用高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)PC12細(xì)胞，24h后，采用蛋白免疫印跡（Western blotting）檢測PC12細(xì)胞中p-Cav-1、p-NR2B的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　1.高糖刺激BV2細(xì)胞后：與C組相比， H組p-JAK2、p-STAT3的表達(dá)上調(diào)（P＜0.05）；
　　2.給予抑制劑AG490后，BV2細(xì)胞中：與C-1組相比，H-1組和SC-1組

5、p-JAK2、p-STAT3的表達(dá)上調(diào)（P＜0.05）；與H-1組相比，AG490-1組的p-JAK2、p-STAT3的表達(dá)下調(diào)（P＜0.05）；H-1組的p-JAK2、p-STAT3表達(dá)與SC-1組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.共培養(yǎng)體系中的PC12細(xì)胞：與C-2組相比，H-2組的PC12細(xì)胞中p-Cav-1、p-NR2B的表達(dá)上調(diào)（P＜0.05）；與H-2組相比，AG490-2組PC12細(xì)胞中的p-Cav-1、p-NR2B的