MicroRNA-185-5p-STIM1通路對胃癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響及臨床意義的相關(guān)研究.pdf

1、胃癌是常見消化道腫瘤，全世界胃癌發(fā)病率在腫瘤發(fā)病率中排第四，胃癌致死率在全球腫瘤致死率中排在第二，胃癌中大概有50％的病人初次確診即為進(jìn)展期胃癌，五年生存率不到30%。目前，胃癌的侵襲性和轉(zhuǎn)移機(jī)制仍然不是很清楚。
　　上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-mesenchymal transition, EMT）是腫瘤轉(zhuǎn)移早期中關(guān)鍵和必須的過程。在上皮間質(zhì)化過程中，腫瘤細(xì)胞失去上皮細(xì)胞特征，包括E-cadherin的表達(dá)、細(xì)胞間的粘附

2、、上皮細(xì)胞極性，獲得間質(zhì)細(xì)胞特征，包括遷移能力和侵犯性。有研究證實(shí)，在乳癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、肺癌、胃癌中，EMT與腫瘤 TNM高分期、高復(fù)發(fā)率以及低的生存率相關(guān)。
　　microRNA(miRNA)是一類內(nèi)生的、高度保守的非編碼小RNA，長度約22個核苷酸，與靶基因的3′UTR區(qū)域特異性結(jié)合，引起其降解或抑制其翻譯，參與基因轉(zhuǎn)錄后表達(dá)水平的調(diào)控，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起到了重要的作用。miRNA與腫瘤的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，參與腫瘤轉(zhuǎn)移級聯(lián)，

3、有望成為新的抗腫瘤轉(zhuǎn)移治療的方法。
　　基質(zhì)相互作用分子1（Stromal interaction molecule1, STIM1）負(fù)責(zé)活化鈣庫操縱性鈣內(nèi)流（SOCE)，在腫瘤細(xì)胞的生長、遷移、血管形成、侵襲中有重要的作用。STIM1通過SOCE作用于小RAS GTP酶、小RAC GTP酶以及鈣蛋白酶調(diào)節(jié)粘著斑周轉(zhuǎn)，從而對腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移發(fā)揮作用。在結(jié)腸癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、幾種類型腫瘤中STIM1是促進(jìn)EMT的關(guān)鍵分子。胃癌中S

4、TIM1是否是miR-185-5p有相互作用，其相互作用機(jī)制以及在胃癌發(fā)展、轉(zhuǎn)移中所起作用及具體機(jī)制目前不清楚。
　　本研究以胃癌組織、胃癌細(xì)胞株為研究對象，應(yīng)用常規(guī)病理、免疫組織化學(xué)、激光掃描共聚焦顯微鏡、細(xì)胞活性檢測試劑盒(cell counting kit-8，cck8)、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell小室、實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（q RT-PCR）、蛋白印跡法（western blot）等方法研究microRNA-18

5、5-5p（miR-185-5p）在胃癌（及癌旁）組織中表達(dá)及其與胃癌臨床病理特征的關(guān)系；研究 miR-185-5p與基質(zhì)相互作用分子1（Stromal interaction molecule1， STIM1）在胃癌組織、胃癌細(xì)胞中表達(dá)的相關(guān)性；觀察miR-185-5p在不同分化的胃癌細(xì)胞株中的表達(dá)；研究miR-185-5p對胃癌細(xì)胞鈣池操縱性鈣離子內(nèi)流（Store-operated Ca2+entry，SOCE)的影響及其對胃癌細(xì)胞生

6、物學(xué)行為的影響；通過檢測上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)記物上皮鈣黏附蛋白（E-cadherin），神經(jīng)鈣黏附蛋白（N-cadherin），波形蛋白（Viminten）的變化來研究miR-185-5p、STIM1、SOCE在胃癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用及其具體機(jī)制。研究STIM1在胃癌組織及胃癌細(xì)胞中的表達(dá)、臨床病理意義及其對胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。闡明miR-185-5p、STIM1、SOCE在胃癌增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用，為胃癌的分子靶向性治療提供新的

7、依據(jù)。
　　本研究共分為三部分：
　　第一部分：miR-185-5p-STIM1-SOCE通路對胃癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響的相關(guān)研究
　　目的：驗(yàn)證胃癌細(xì)胞中miR-185-5p負(fù)性調(diào)控STIM1，探討miR-185-5p對鈣庫操縱性 Ca2+內(nèi)流的影響，探討 miR-185-5p與 SOCE抑制劑SKF96365對胃癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲生物學(xué)行為的影響以及與胃癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的相關(guān)性。
　　方法：
　

8、　1.利用 qRT-PCR和免疫組化方法檢測胃癌組織中 miR-185-5p和STIM1表達(dá)的相關(guān)性。qRT-PCR檢測人胃粘膜上皮細(xì)胞GES-1和常見胃癌細(xì)胞株中miR-185-5p的表達(dá)。SGC-7901細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-185-5p mimics和BGC-823細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-185-5p inhibitor，利用qRT-PCR和Western-blot方法檢測miR-185-5p和STIM1表達(dá)的相關(guān)性。
　　2.SGC-7

9、901細(xì)胞轉(zhuǎn)染 miR-185-5p mimics和 BGC-823細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-185-5p inhibitor，應(yīng)用共聚焦顯微鏡檢測 miR-185-5p對鈣庫操縱性Ca2+內(nèi)流的影響。
　　3.通過 CCK法檢測 miR-185-5p與 SOCE抑制劑 SKF96365對SGC-7901和 BGC-823細(xì)胞的增殖情況。應(yīng)用 Transwell小室檢測細(xì)胞miR-185-5p與SOCE抑制劑 SKF96365對SGC-79

10、01和BGC-823細(xì)胞的遷移、侵襲情況。
　　4.利用 qRT-PCR和 Western-blot檢測 miR-185-5p與 SOCE抑制劑SKF96365對SGC-7901和BGC-823細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)記物上皮鈣黏附蛋白、神經(jīng)鈣黏附蛋白、波形蛋白的影響。
　　結(jié)果：
　　1.驗(yàn)證胃癌組織中 miR-185-5p與 STIM1表達(dá)相關(guān)性。胃癌組織中miR-185-5p表達(dá)量相對于癌旁組織顯著低表達(dá)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

11、和TNM高分期相關(guān)。STIM1免疫組化染色陽性標(biāo)本中 miR-185-5p表達(dá)明顯低于STIM1免疫組化染色陰性標(biāo)本，P=0.004。
　　2.miR-185-5p在不同胃癌細(xì)胞株中的表達(dá)水平。以GES-1為對照， miR-185-5p在胃癌細(xì)胞SGC-7901、MKN-28、MGC-803、BGC-823、AGS為低表達(dá)。miR-185-5p在 BGC-823細(xì)胞中表達(dá)相對稍高，在SGC-7901相對較低。轉(zhuǎn)染 miR-185-

12、5p inhibitor敲低 BGC-823中miR-185-5p表達(dá)、轉(zhuǎn)染miR-185-5p mimics上調(diào)SGC-7901中miR-185-5p表達(dá)進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。
　　3.miR-185-5p負(fù)性調(diào)控胃癌細(xì)胞STIM1表達(dá)水平。SGC-7901細(xì)胞中miR-185-5p過表達(dá)后，STIM1的mRNA和蛋白水平的表達(dá)量下降，與陰性對照組相比，P<0.01。敲除BGC-823細(xì)胞的miR-185-5p表達(dá)后，STIM1的mRN

13、A和蛋白水平的表達(dá)量上調(diào)，與陰性對照組相比，P<0.01。
　　4.miR-185-5p對鈣庫操縱性 Ca2+內(nèi)流的影響。Fluo-4/AM熒光探針法檢測過表達(dá) miR-185-5p的SGC-7901細(xì)胞和敲低 miR-185-5p的BGC-823細(xì)胞中 SOCE的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，過表達(dá) miR-185-5p的SGC-7901細(xì)胞，相對于陰性對照組， TG激活的Ca2+振幅變化不明顯（P>0.05），加入鈣離子激活的SOCE顯

14、著降低，有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.01。敲低miR-185-5p的BGC-823細(xì)胞，相對于陰性對照組，加入TG后激活的Ca2+振幅變化不明顯，加入鈣離子激活的SOCE顯著增高，P<0.01。
　　5.miR-185-5p與SOCE抑制劑 SKF96365對SGC-7901和BGC-823細(xì)胞增殖的影響。應(yīng)用CCK8法對胃癌細(xì)胞BGC-823和SGC-7901增殖進(jìn)行檢測。SGC-7901細(xì)胞，相對于陰性對照組，miR-185-5p

15、mimics組的增殖能力下降；陰性對照組、miR-185-5p mimics組的OD值24h時間點(diǎn)分別為0.736±0.0743、0.596±0.012，P=0.000；48h為0.826±0.0912 VS0.663±0.0393，P=0.002；72h為0.816±0.159 VS0.648±0.047，P=0.015。BGC-823細(xì)胞，相對于陰性對照組，miR-185-5p inhibitor組的增殖能力增強(qiáng)；陰性對照組、miR

16、-185-5p mimics組的OD值24h時間點(diǎn)分別為1.538±0.087、1.673±0.123， P=0.031；48h為1.564±0.067 VS1.994±0.397， P=0.007；72h為1.582±0.293 VS2.02±0.185，P=0.003。在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入終濃度為1.5uM的SOCE抑制劑SKF96365，上述miR-185-5p對胃癌SGC-7901、BGC-823的增殖能力的影響現(xiàn)象消失，P>0.

17、05。
　　6.miR-185-5p與SOCE抑制劑 SKF96365對SGC-7901和BGC-823細(xì)胞遷移的影響。在轉(zhuǎn)染miR-185-5p mimcs或miR-185-5p inhibitor及陰性對照48h后，應(yīng)用 Transwell遷移模型對胃癌細(xì)胞 SGC-7901和BGC-823遷移進(jìn)行檢測。SGC-7901的miR-185-5p mimics組遷移能力明顯低于陰性對照組；BGC-823的miR-185-5p in

18、hibitor組遷移能力明顯高于陰性對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.01。在同時予以SKF96365處理后，上述的差異則不明顯，P>0.05。
　　7.miR-185-5p與SOCE抑制劑 SKF96365對SGC-7901和BGC-823細(xì)胞侵襲的影響。在轉(zhuǎn)染miR-185-5p mimcs或miR-185-5p inhibitor及陰性對照48h后，應(yīng)用 Transwell侵襲模型對胃癌細(xì)胞 SGC-7901和BGC-823

19、遷移進(jìn)行檢測。SGC-7901的miR-185-5p mimics組侵襲能力明顯低于陰性對照組；BGC-823的miR-185-5p inhibitor組侵襲能力明顯高于陰性對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.01。在同時予以SKF96365處理后，上述的差異則不明顯，P>0.05。
　　8.miR-185-5p與SOCE抑制劑 SKF96365對SGC-7901和 BGC-823的E-cadherin、N-cadherin、Vim

20、inten表達(dá)的影響。在轉(zhuǎn)染miR-185-5p mimcs或miR-185-5p inhibitor及陰性對照24h后，應(yīng)用qRT-PCR檢測胃癌細(xì)胞SGC-7901和 BGC-823中 STIM1、E-cadherin、N-cadherin、Viminten的mRNA的表達(dá)。轉(zhuǎn)染成功48h后, Western blot檢測SGC-7901、BGC-823細(xì)胞STIM1、E-cadherin、 N-cadherin以及Vimiten蛋

21、白水平的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在miR-185-5p mimics升高SGC-7901細(xì)胞miR-185-5p表達(dá)后， STIM1和E-cadherin的mRNA和蛋白水平表達(dá)明顯下降，而N-cadherin和 Vimiten的mRNAh和蛋白水平表達(dá)明顯升高， P<0.01。利用miR-185-5p inhibitor抑制 BGC-823細(xì)胞 miR-185-5p的表達(dá)后，STIM1和E-cadherin的mRNA和蛋白水平表達(dá)明顯升高，

22、而N-cadherin和Vimiten的mRNA和蛋白水平表達(dá)則明顯下降，P<0.01。在給予 SOCE抑制劑SKF96365后，在miR-185-5p過表達(dá)的SGC-7901細(xì)胞、miR-185-5p敲低的BGC-823細(xì)胞STIM1的mRNA和蛋白表達(dá)量與miR-185-5p表達(dá)成負(fù)相關(guān)，但上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)記物 E-cadherin、 N-cadherin以及 Vimiten的mRNA和蛋白表達(dá)相對于陰性對照組沒有明顯差異，P>0.0

23、5。
　　小結(jié)：
　　1.miR-185-5p在胃癌細(xì)胞株、胃癌組織中低表達(dá)。胃癌組織中miR-185-5p表達(dá)量相對于癌旁組織顯著低表達(dá)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM高分期相關(guān)。胃癌組織中miR-185-5p與STIM1表達(dá)量呈負(fù)性相關(guān)。
　　2.miR-185-5p mimics能成功轉(zhuǎn)染SGC-7901，上調(diào)miR-185-5p表達(dá)。miR-185-5p inhibitor能成功轉(zhuǎn)染 BGC-823細(xì)胞，下調(diào)miR-18

24、5-5p的表達(dá)水平。
　　3. miR-185-5p負(fù)性調(diào)控SGC-7901、BGC-823細(xì)胞的STIM1表達(dá)及SOCE振幅。
　　4.過表達(dá)miR-185-5p能抑制SGC-7901細(xì)胞的增殖，敲除miR-185-5p能促進(jìn) BGC-823細(xì)胞的增殖。SOCE抑制劑 SKF96365能消除miR-185-5p對SGC-7901和BGC-823細(xì)胞增殖的影響。
　　5.過表達(dá) miR-185-5p能抑制 SGC-79

25、01細(xì)胞的遷移及侵襲，敲除miR-185-5p能促進(jìn)BGC-823細(xì)胞的遷移及侵襲。miR-185-5p對SGC-7901和BGC-823細(xì)胞遷移、侵襲的影響，在予以SOCE抑制劑 SKF96365處理后沒有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　6. miR-185-5p負(fù)性調(diào)控STIM1、SOCE來調(diào)節(jié)SGC-7901、BGC-823細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。SOCE抑制劑 SKF96365能消除 miR-185-5p對SGC-7901和BGC-823細(xì)

26、胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響。
　　第二部分：STIM1對胃癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、侵襲及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響的研究
　　目的：研究STIM1對胃癌細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移、侵襲等生物學(xué)行為的影響，驗(yàn)證STIM1與胃癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的相關(guān)性。
　　方法：
　　1.利用qRT-PCR和Western-blot檢測了人胃粘膜上皮細(xì)胞GES-1和常見胃癌細(xì)胞株中STIM1的表達(dá)。
　　2.選擇胃癌細(xì)胞株中 STIM1表達(dá)最高

27、的BGC-823及相對較低的SGC-7901做后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。采用瞬時轉(zhuǎn)染的方法，將 STIM1-siRNA或陰性對照轉(zhuǎn)入SGC-7901、BGC-823，通過CCK法檢測胃癌細(xì)胞的增殖情況，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況，應(yīng)用Transwell小室檢測細(xì)胞遷移、侵襲情況。
　　3.利用qRT-PCR和Western-blot檢測STIM1對胃癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)志物上皮鈣黏附蛋白、神經(jīng)鈣黏附蛋白、波形蛋白的影響。
　　結(jié)果：

28、>　　1.不同胃癌細(xì)胞株中STIM1的表達(dá)水平。相對于GES-1，STIM1在SGC-7901、MKN-28、MGC-803、BGC-823、AGS中過表達(dá)。BGC-823中STIM1表達(dá)最高，SGC-7901相對較低。
　　2.轉(zhuǎn)染STIM1-siRNA的BGC-823和SGC-7901中STIM1表達(dá)水平。使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)以STIM1-siRNA轉(zhuǎn)染BGC-823和SGC-7901，再以qRT-PCR、Western-blo

29、t法檢測STIM1的表達(dá)，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染STIM1-siRNA的BGC-823和SGC-7901中，STIM1表達(dá)顯著低于陰性對照和空白對照組，P<0.01，提示轉(zhuǎn)染成功，可行后續(xù)試驗(yàn)。
　　3.敲除STIM1對胃癌細(xì)胞SGC-7901和BGC-823增殖的影響。在轉(zhuǎn)染STIM1-siRNA及陰性對照24h、48h、72h后，應(yīng)用CCK8法對胃癌細(xì)胞BGC-823和SGC-7901增殖進(jìn)行檢測。SGC-7901細(xì)胞24hNC組、si

30、RNA組的OD值分別為0.809±0.073、0.801±0.0145，24h時間點(diǎn)無統(tǒng)計學(xué)意義， P=0.938；48h NC組、siRNA組的OD值分別為0.96±0.34、0.65±0.184， P<0.05；72h NC組、siRNA組的OD值分別為0.938±0.259、0.874±0.215， P<0.01。BGC-823細(xì)胞24h NC組、siRNA組的OD值分別為1.563±0.195、1.332±0.0654，P<0.

31、05；48h NC組、siRNA組的OD值分別為1.699±0.142、1.425±0.0389，P<0.01。72h NC組、siRNA組的OD值分別為1.911±0.110、1.611±0.138，P<0.05。
　　4.敲除STIM1對胃癌細(xì)胞SGC-7901和BGC-823凋亡的影響。在轉(zhuǎn)染STIM1-siRNA及陰性對照48h后，應(yīng)用流式細(xì)胞儀對胃癌細(xì)胞胃癌細(xì)胞 SGC-7901和 BGC-823凋亡進(jìn)行檢測。SGC-7

32、901細(xì)胞 NC組 VS si STIM1組=4.753±0.15%VS6.533±0.153%，P<0.01。BGC-823細(xì)胞 NC組 vs si STIM1組=2.733±0.208%VS6.763±0.764%，P<0.01。
　　5.敲除STIM1對胃癌細(xì)胞SGC-7901和BGC-823遷移的影響。在轉(zhuǎn)染STIM1-siRNA及陰性對照48h后，應(yīng)用Transwell遷移模型對胃癌細(xì)胞胃癌細(xì)胞SGC-7901和BGC-

33、823遷移進(jìn)行檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果示SGC-7901細(xì)胞48h NC組遷移的細(xì)胞數(shù)為443.33±21.825，si STIM1組遷移的細(xì)胞數(shù)為133±15.716， P=0.000。BGC-823細(xì)胞 NC組遷移的細(xì)胞數(shù)為642.67±31.342，si STIM1組遷移的細(xì)胞數(shù)為254.33±17.502，P=0.000。
　　6.敲除STIM1對胃癌細(xì)胞SGC-7901和BGC-823侵襲的影響。在轉(zhuǎn)染STIM1-siRNA及陰性

34、對照48h后，應(yīng)用Transwell侵襲模型對胃癌細(xì)胞SGC-7901和BGC-823侵襲進(jìn)行檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果示SGC-7901細(xì)胞48h NC組侵襲出的細(xì)胞為431±19，siSTIM1組為94±11，P=0.000。BGC-823細(xì)胞 NC組侵襲出的細(xì)胞為259±18，siSTIM1為99±10。siSTIM1組與NC組相比，P=0.000。
　　7.敲除 STIM1對胃癌細(xì)胞 SGC-7901和 BGC-823的E-cadhe

35、rin、N-cadherin、Viminten表達(dá)的影響。在轉(zhuǎn)染STIM1-siRNA及陰性對照24h后，應(yīng)用 qRT-PCR檢測胃癌細(xì)胞 SGC-7901和 BGC-823中 STIM1、E-cadherin、N-cadherin、Viminten的mRNA的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示SGC-7901和BGC-823細(xì)胞siSTIM1組中，在STIM1被敲除后，N-cadherin、Viminten較NC組明顯降低，P<0.01，E-cadh

36、erin卻明顯升高，P<0.05。在轉(zhuǎn)染STIM1-siRNA及陰性對照48h后，應(yīng)用Western-blot檢測胃癌細(xì)胞SGC-7901和BGC-823中STIM1、上皮鈣黏附蛋白、神經(jīng)鈣黏附蛋白、波形蛋白的蛋白表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示 STIM1在敲除后， SGC-7901、BGC-823中N-cadherin、Viminten蛋白水平表達(dá)均顯著下降，P<0.01；而E-cadherin蛋白水平表達(dá)顯著升高，P<0.01。
　　小結(jié)

37、：
　　1.STIM1在SGC-7901、MKN-28、MGC-803、BGC-823、AGS中過表達(dá)。
　　2.STIM1-siRNA能成功轉(zhuǎn)染 SGC-7901和 BGC-823細(xì)胞，能下調(diào)SGC-7901和BGC-823細(xì)胞中STIM1的表達(dá)水平。
　　3.下調(diào)STIM1表達(dá)能抑制SGC-7901和BGC-823細(xì)胞的增殖。
　　4.下調(diào)STIM1表達(dá)能促進(jìn)SGC-7901和BGC-823細(xì)胞的凋亡。

38、>　　5.下調(diào)STIM1表達(dá)能抑制SGC-7901和BGC-823細(xì)胞的遷移與侵襲。
　　6.下調(diào)STIM1表達(dá)后SGC-7901和BGC-823細(xì)胞發(fā)生了EMT逆轉(zhuǎn)，即間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)化。
　　第三部分：胃癌組織中STIM1的表達(dá)與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化關(guān)系及臨床意義
　　目的：探討基質(zhì)間質(zhì)分子1（stromal interaction molecule1，STIM1）在胃癌組織中的表達(dá)以及STIM1和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化之間關(guān)系。

39、　　方法：
　　1.選取河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院外三科在2009年6月至2011年10月手術(shù)切除的170例胃腺癌和35例癌旁組織標(biāo)本，術(shù)前未接受放、化療，未同時合并其他腫瘤，運(yùn)用免疫組化方法檢測胃癌和癌旁標(biāo)本組織中STIM1、E-cadherin和β-cadherin表達(dá)。
　　2.采用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，采用卡方檢驗(yàn)（X2檢驗(yàn)）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。采用 Kaplan-Meier繪制生存曲線。采用二分類多因素 logist

40、ics回歸模型探討影響 STIM1陽性表達(dá)的因素。cox比例風(fēng)險回歸回歸模型探討影響患者死亡的因素并分析其與臨床病理特點(diǎn)的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1.STIM1主要表達(dá)在胃癌組織的胞漿，STIM1在胃癌組織中陽性表達(dá)率為43.5%（74/170），明顯高于癌旁組織（8.60%,3/35,χ2=15.12, P<0.001）。
　　2.胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性病人STIM1陽性表達(dá)率明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性病人(P<0.001

41、)。TNM分期I/II期胃癌組織中STIM1陽性表達(dá)率為33.5%（17/57），明顯低于III/IV(66.5%,57/113, P=0.01)。STIM1表達(dá)與性別、年齡、腫瘤分化程度、腫瘤位置、腫瘤大小不相關(guān)，P>0.05。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌病人STIM1陽性表達(dá)的唯一獨(dú)立危險因素。
　　3.使用Kaplan–Meier分析，我們發(fā)現(xiàn)STIM1表達(dá)陽性的胃癌病人總生存率明顯低于STIM1表達(dá)陰性的胃癌病人，P=0.043。多因

42、素分析提示患者生存率明顯相關(guān)的因素有STIM1陽性表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高的TNM分期。cox比例風(fēng)險回歸模型顯示 STIM1陽性表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌病人的獨(dú)立預(yù)后因素
　　4.E-cadherin和β-catenin異常表達(dá)在胃癌細(xì)胞的胞漿或胞核，胃癌組織中，E-cadherin和β-catenin異常表達(dá)率分別為61.8%(105/170)、52.4%(89/170)。在癌旁組織中，E-cadherin和β-catenin異常表

43、達(dá)率分別11.4%(4/35)和20.0%(7/35)。E-cadherin和β-catenin異常表達(dá)率在胃癌組織和癌旁組織中具有顯著差異，P<0.001。E-cadherin異常表達(dá)率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM高分期明顯相關(guān)，P<0.001，β-catenin異常表達(dá)率與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期明顯相關(guān)，P<0.001，與其他臨床病理參數(shù)不相關(guān)，P>0.05。
　　5.STIM1陽性的胃癌組織中 E-cadherin陽性率為

44、78.4%(58/74)、β-catenin陽性率90.5%(67/74)。STIM1表達(dá)與E-cadherin(χ2=34.555，P<0.001，κ=0.447)和β-catenin(χ2=45.947，P<0.001，κ=0.486)異常表達(dá)顯著相關(guān)。E-cadherin異常表達(dá)的胃癌組織中β-cadherin異常表達(dá)率為79.8%，E-cadherin異常表達(dá)與β-cadherin異常表達(dá)顯著相關(guān)(P<0.001)；胃癌組織中S

45、TIM1表達(dá)與E-cadherin(P<0.001)和β-cadherin(P<0.001)異常表達(dá)顯著相關(guān)。
　　小結(jié)：
　　1.STIM1在胃癌組織中表達(dá)明顯高于癌旁組組。
　　2.胃癌組織中STIM1表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高的TNM分期顯著相關(guān)。
　　3.胃癌組織中STIM1表達(dá)陽性的病人總生存率明顯低于表達(dá)陰性的胃癌病人。STIM1表達(dá)陽性和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌病人的獨(dú)立預(yù)后因素。
　　4.胃癌組織中異常表

46、達(dá)的E-cadherin和β-cadherin顯著高于癌旁組織。
　　5.胃癌組織中STIM1表達(dá)與E-cadherin和β-cadherin異常表達(dá)顯著相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.miR-185-5p在胃癌細(xì)胞株、胃癌組織中低表達(dá)。STIM1在胃癌細(xì)胞株、胃癌組織中過表達(dá)。胃癌組織中miR-185-5p表達(dá)量相對于癌旁組織顯著低表達(dá)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM高分期相關(guān)。STIM1在胃癌組織中過表達(dá)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高的TN

47、M分期顯著相關(guān)。胃癌組織中 STIM1表達(dá)陽性的病人總生存率明顯低于表達(dá)陰性的胃癌病人。STIM1表達(dá)陽性和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌病人的獨(dú)立預(yù)后因素，miR-185-5p與STIM1表達(dá)量呈負(fù)性相關(guān)，miR-185-5p與STIM1可以成為胃癌轉(zhuǎn)移的預(yù)測因素。
　　2.miR-185-5p負(fù)性調(diào)控胃癌細(xì)胞的STIM1表達(dá)及SOCE振幅。
　　3.miR-185-5p抑制胃癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲。SOCE抑制劑SKF96365能消

48、除miR-185-5p對胃癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲的影響。
　　4.敲除STIM1能抑制胃癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲。
　　5.STIM1促進(jìn)了胃癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化：胃癌組織中 STIM1表達(dá)與E-cadherin和β-cadherin異常表達(dá)顯著。敲除 STIM1，引起胃癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化逆轉(zhuǎn)，即間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)化。
　　6.miR-185-5p-STIM1-SOCE通路調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。
　　7.miR-185-