應(yīng)用循環(huán)腫瘤細(xì)胞解析胰腺癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化全程及其臨床意義探究.pdf

1、胰腺癌早期即具有極強(qiáng)的侵襲轉(zhuǎn)移能力，導(dǎo)致臨床上確診胰腺癌的患者手術(shù)可切除率低，臨床預(yù)后極差。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-Mesenchymal Transition，EMT)被認(rèn)為是腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵機(jī)制之一，但通常只能對(duì)原位腫瘤及轉(zhuǎn)移灶進(jìn)行研究，無法對(duì)腫瘤細(xì)胞血行轉(zhuǎn)移過程中的EMT進(jìn)行觀察，因此少有針對(duì)胰腺癌EMT全程的研究。而循環(huán)腫瘤細(xì)胞(Circulating tumor cell，CTC)除可作為“液體活檢”之外，因

2、其產(chǎn)生與EMT直接相關(guān)也被認(rèn)為是研究循環(huán)血中EMT的重要工具，使得針對(duì)胰腺癌原位腫瘤-外周血腫瘤細(xì)胞-轉(zhuǎn)移灶的EMT全程研究成為可能。
　　目的:
　　1.評(píng)估胰腺癌CTC作為“液體活檢”的臨床應(yīng)用前景。
　　2.通過比較胰腺癌原位腫瘤、外周血CTC和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中上皮和間質(zhì)標(biāo)志物的表達(dá)對(duì)胰腺癌EMT的全程進(jìn)行解析。
　　方法:
　　1.采用SET-iFISH法對(duì)胰腺癌患者外周血CTC進(jìn)行分類計(jì)數(shù)及動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，

3、分析不同分類計(jì)數(shù)與手術(shù)、化療、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、臨床病理及預(yù)后的相關(guān)性。
　　2.采用芯片法對(duì)胰腺癌患者外周血CTC進(jìn)行上皮標(biāo)志物E-cadherin和間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin的染色，分析不同EMT分類情況與手術(shù)、化療、臨床病理的相關(guān)性。
　　3.應(yīng)用免疫組化對(duì)確診胰腺導(dǎo)管腺癌患者的原位腫瘤及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中上皮標(biāo)志物E-cadherin和間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin進(jìn)行染色及評(píng)分，分析EMT水平與臨床病理及預(yù)后的相關(guān)性;并通過與芯片法

4、中CTC染色情況比較對(duì)胰腺癌EMT全程進(jìn)行解析。
　　結(jié)果:
　　1.SET-iFISH法:研究共對(duì)27名研究對(duì)象（20名胰腺導(dǎo)管腺癌患者、5名胰腺良性占位及2名健康受試者）的63例血標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。CTC分類計(jì)數(shù)與手術(shù)、化療、臨床病理特征呈現(xiàn)一定變化趨勢(shì)，而術(shù)前檢測(cè)到CTM的患者具有更短的OS(p=0.027)和PFS(p=0.015)。在原位腫瘤及胰腺癌腹水轉(zhuǎn)移細(xì)胞中以上皮型細(xì)胞為主，而外周血CTC中絕大多數(shù)為非上皮型細(xì)胞

5、。
　　2.芯片法:研究共對(duì)24名研究對(duì)象（22名胰腺導(dǎo)管腺癌患者及2名健康受試者）的46例血標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)CTC中EMT情況(E、E＞M、E=M、E＜M和M型)進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。手術(shù)可導(dǎo)致CTC總數(shù)(p=0.005)及M型CTC(p=0.000)計(jì)數(shù)下降，而化療則導(dǎo)致E型CTC(p=0.004)計(jì)數(shù)下降，進(jìn)而導(dǎo)致間質(zhì)為主型CTC比例則呈上升趨勢(shì)。CTC總數(shù)與臨床分期、T分期及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)(p＜0.05)，但CTC中上皮和間質(zhì)比例

6、與侵襲轉(zhuǎn)移等臨床病理特征間相關(guān)性不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.研究共納入27名確診胰腺導(dǎo)管腺癌的患者，其癌組織中E-cadherin的IHC評(píng)分與分化程度(p=0.016)呈正相關(guān)，而Vimentin與分化程度負(fù)相關(guān)(p=0.016)。E＞M組和E≤M組平均無病生存期分別為627.5±49.0天和337.1±80.9天，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=4.867，p=0.027）。胰腺癌癌組織中E-cadherin表達(dá)下降而Vimenti

7、n表達(dá)升高。胰腺癌原位腫瘤及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中以E-cadherin表達(dá)為主，而外周血CTC上上皮及間質(zhì)比例約各占50％。
　　結(jié)論:
　　1.液體活檢:CTM與胰腺癌不良預(yù)后密切相關(guān);胰腺癌CTC分類計(jì)數(shù)與臨床分期、T分期及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)，并隨手術(shù)、化療、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移成一定變化趨勢(shì)。
　　2.胰腺癌EMT全程:胰腺癌原位腫瘤-外周血CTC-轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)呈現(xiàn)EMT/MET變化趨勢(shì)，EMT與化療及不良預(yù)后相關(guān)，但其與侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系仍需