EGR1基因在As2O3抗腫瘤細(xì)胞作用中的角色研究.pdf

1、目的：通過(guò)檢測(cè)四種實(shí)體腫瘤細(xì)胞（肺癌A549、大腸癌LoVo、結(jié)腸癌HT-29、肝癌HepG2細(xì)胞）早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子（Early growth responsive one，EGR1）給藥前基因的表達(dá)量，并計(jì)算其在給予三氧化二砷（Arsenic trioxide，As2O3）治療后以上四種細(xì)胞的增殖抑制率，判斷EGR1基因是否可以作為As2O3在抗腫瘤治療中的敏感指標(biāo)；通過(guò)計(jì)算其半數(shù)抑制濃度，以篩選其用藥終濃度，并觀察在給藥前后基因表達(dá)

2、量的變化情況。從而探討EGR1基因在As2O3治療腫瘤作用中的影響及其所扮演的角色，使廣大患者通過(guò)基因檢測(cè)就可以預(yù)測(cè)腫瘤的治療效果及預(yù)后提供實(shí)驗(yàn)資料。
　　方法:實(shí)驗(yàn)室常規(guī)培養(yǎng)肺癌A549、大腸癌LoVo、結(jié)腸癌HT-29、肝癌HepG2細(xì)胞系，熒光定量PCR（q-PCR）法檢測(cè)四種腫瘤細(xì)胞給藥前EGR1基因的表達(dá)量；采用MTT法檢測(cè)不同濃度As2O3對(duì)以上四種腫瘤細(xì)胞的增殖抑制率，并觀察As2O3對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用與EGR

3、1表達(dá)量之間的關(guān)系；應(yīng)用SPSS19.0軟件，計(jì)算As2O3分別作用于四種腫瘤細(xì)胞后的半數(shù)抑制濃度IC50并作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的終濃度，q-PCR法檢測(cè)四種腫瘤細(xì)胞給藥后EGR1基因的表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　給藥前肺癌A549、大腸癌LoVo、結(jié)腸癌HT-29、肝癌HepG2細(xì)胞的EGR-1基因相對(duì)表達(dá)量的關(guān)系為L(zhǎng)oVo＞HT-29＞A549＞HepG2細(xì)胞（P＜0.05）。
　　不同濃度的As2O3作用于人肺癌A549細(xì)

4、胞、大腸癌LoVo細(xì)胞、結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞、肝癌HepG2細(xì)胞24、48和72h后均起到增殖抑制作用，細(xì)胞的增殖抑制均具有濃度和時(shí)間依賴(lài)性（P＜0.01），觀察其16μmol/LAs2O3作用72 h后肺癌A549、大腸癌LoVo、結(jié)腸癌HT-29、肝癌HepG2細(xì)胞的增殖抑制率分別為73.26％、82.34%、80.42%、60.1%，即LoVo＞HT-29＞A549＞HepG2細(xì)胞（P＜0.01）。
　　As2O3作用于A5

5、49細(xì)胞24h、48h、72h半數(shù)抑制濃度IC50分別為16.65、11.29、7.19μmol/L；As2O3作用于LoVo細(xì)胞后IC50分別為4.40、2.60、1.32μmol/L；As2O3作用于HT-29細(xì)胞后IC50分別為5.75、5.20、4.13μmol/L；As2O3作用于HepG2細(xì)胞后IC50分別為14.68、10.29、7.23μmol/L。
　　檢測(cè)給予半數(shù)抑制濃度As2O3后A549、LoVo、HT-2

6、9、HepG2細(xì)胞EGR1基因的表達(dá)量，結(jié)果顯示在給藥后A549細(xì)胞和HT-29細(xì)胞EGR1表達(dá)量降低，給藥后HepG2細(xì)胞和LoVo細(xì)胞EGR1表達(dá)量增高（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　（1）EGR1基因在As2O3抗人肺癌A549細(xì)胞、大腸癌LoVo細(xì)胞、結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞、肝癌HepG2細(xì)胞中起到敏感指標(biāo)作用，即當(dāng)腫瘤細(xì)胞EGR1基因高表達(dá)時(shí)，其As2O3抗腫瘤細(xì)胞的增殖抑制率同樣較高（LoVo＞HT-29＞A5