EGR1基因在As2O3抗腫瘤細胞作用中的角色研究.pdf

1、目的：通過檢測四種實體腫瘤細胞（肺癌A549、大腸癌LoVo、結腸癌HT-29、肝癌HepG2細胞）早期生長反應因子（Early growth responsive one，EGR1）給藥前基因的表達量，并計算其在給予三氧化二砷（Arsenic trioxide，As2O3）治療后以上四種細胞的增殖抑制率，判斷EGR1基因是否可以作為As2O3在抗腫瘤治療中的敏感指標；通過計算其半數(shù)抑制濃度，以篩選其用藥終濃度，并觀察在給藥前后基因表達

2、量的變化情況。從而探討EGR1基因在As2O3治療腫瘤作用中的影響及其所扮演的角色，使廣大患者通過基因檢測就可以預測腫瘤的治療效果及預后提供實驗資料。
　　方法:實驗室常規(guī)培養(yǎng)肺癌A549、大腸癌LoVo、結腸癌HT-29、肝癌HepG2細胞系，熒光定量PCR（q-PCR）法檢測四種腫瘤細胞給藥前EGR1基因的表達量；采用MTT法檢測不同濃度As2O3對以上四種腫瘤細胞的增殖抑制率，并觀察As2O3對腫瘤細胞的增殖抑制作用與EGR

3、1表達量之間的關系；應用SPSS19.0軟件，計算As2O3分別作用于四種腫瘤細胞后的半數(shù)抑制濃度IC50并作為后續(xù)實驗的終濃度，q-PCR法檢測四種腫瘤細胞給藥后EGR1基因的表達量。
　　結果：
　　給藥前肺癌A549、大腸癌LoVo、結腸癌HT-29、肝癌HepG2細胞的EGR-1基因相對表達量的關系為LoVo＞HT-29＞A549＞HepG2細胞（P＜0.05）。
　　不同濃度的As2O3作用于人肺癌A549細

4、胞、大腸癌LoVo細胞、結腸癌HT-29細胞、肝癌HepG2細胞24、48和72h后均起到增殖抑制作用，細胞的增殖抑制均具有濃度和時間依賴性（P＜0.01），觀察其16μmol/LAs2O3作用72 h后肺癌A549、大腸癌LoVo、結腸癌HT-29、肝癌HepG2細胞的增殖抑制率分別為73.26％、82.34%、80.42%、60.1%，即LoVo＞HT-29＞A549＞HepG2細胞（P＜0.01）。
　　As2O3作用于A5

5、49細胞24h、48h、72h半數(shù)抑制濃度IC50分別為16.65、11.29、7.19μmol/L；As2O3作用于LoVo細胞后IC50分別為4.40、2.60、1.32μmol/L；As2O3作用于HT-29細胞后IC50分別為5.75、5.20、4.13μmol/L；As2O3作用于HepG2細胞后IC50分別為14.68、10.29、7.23μmol/L。
　　檢測給予半數(shù)抑制濃度As2O3后A549、LoVo、HT-2

6、9、HepG2細胞EGR1基因的表達量，結果顯示在給藥后A549細胞和HT-29細胞EGR1表達量降低，給藥后HepG2細胞和LoVo細胞EGR1表達量增高（P＜0.01）。
　　結論：
　?。?）EGR1基因在As2O3抗人肺癌A549細胞、大腸癌LoVo細胞、結腸癌HT-29細胞、肝癌HepG2細胞中起到敏感指標作用，即當腫瘤細胞EGR1基因高表達時，其As2O3抗腫瘤細胞的增殖抑制率同樣較高（LoVo＞HT-29＞A5