轉(zhuǎn)4-1BBL基因的小鼠肝癌細(xì)胞疫苗抗腫瘤作用的研究.pdf

1、為了研究4-18BL在抗肝癌免疫中的應(yīng)用價(jià)值,我們克隆了小鼠4-1BBLcDNA并將其導(dǎo)入小鼠肝癌細(xì)胞Hepal-6中制成腫瘤疫苗,觀察了該腫瘤疫苗在體內(nèi)外的特異性抗腫瘤作用.首先我們采用RT-PCR的方法檢測(cè)了4-1BBL在淋巴細(xì)胞及多株肝癌細(xì)胞中的表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn)在經(jīng)PHA誘導(dǎo)活化的人外周血淋巴細(xì)胞以及小鼠的脾淋巴細(xì)胞均可檢測(cè)到4-1BBL的表達(dá),但是未經(jīng)誘導(dǎo)的靜止的淋巴細(xì)胞則不表達(dá)4-1BBL;對(duì)五株肝癌細(xì)胞系及一株正常肝細(xì)胞系的檢

2、測(cè)中,發(fā)現(xiàn)只有HepG2可表達(dá)4-1BBL,其它細(xì)胞系均未檢測(cè)到表達(dá).為了獲得4-1BBL的全長基因,我們首先根據(jù)GENEBANK中小鼠4-1BBL的基因序列,設(shè)計(jì)了用于克隆4-1BBLcDNA的引物,實(shí)驗(yàn)中選用C57BL/6小鼠的脾細(xì)胞作為總RNA的來源,并預(yù)先用植物血凝素進(jìn)行刺激.利用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將共刺激分子4-1BBL基因?qū)胄∈蟾伟┘?xì)胞,經(jīng)篩選后以期獲得穩(wěn)定表達(dá)克隆.為了觀察轉(zhuǎn)染m4-1BBL的小鼠Hepal-6細(xì)胞是否具有誘導(dǎo)