A20基因及As2O3對(duì)口腔腺樣囊性癌細(xì)胞株ACC的作用機(jī)制研究.pdf

1、隨著近幾年環(huán)境污染的日益加重，腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma, ACC)的發(fā)病率呈逐年遞增趨勢(shì)。腺樣囊性癌是發(fā)生在口腔頜面部常見(jiàn)的惡性腫瘤，其十年生存率僅為10％，其治療和預(yù)防是近年來(lái)臨床研究的重點(diǎn)。
　　本課題主要研究A20及As2O3對(duì)ACC細(xì)胞株的作用機(jī)制，進(jìn)一步闡明ACC發(fā)生轉(zhuǎn)移及凋亡的原因，為臨床生物學(xué)及化學(xué)治療ACC提供理論基礎(chǔ)。
　　為了篩選出ACC轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因，通過(guò)對(duì)口腔臨床腺

2、樣囊性癌高/低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株ACC-M/ACC-2做基因芯片分析，重復(fù)20次后，得到表達(dá)有顯著差異的基因：升高表達(dá)23條，下降表達(dá)43條。經(jīng)信號(hào)通路相關(guān)因子分析得出：口腔腺樣囊性癌的轉(zhuǎn)移性高低與NFκB信號(hào)通路(nuclear factorΚB signal pathway)的激活情況高度相關(guān)，相關(guān)基因分別為：NFΚB1(P50), NFΚBIA, NFκB3(P65), NFκB2, IκBE, IκKα, A20, ICAM1等8條基因

3、。本研究選取A20基因進(jìn)一步研究。
　　本研究體外構(gòu)建人A20基因真核表達(dá)載體pEGFP-N3-A20，將其轉(zhuǎn)染ACC-2細(xì)胞，驗(yàn)證 A20基因?qū)Φ娃D(zhuǎn)移細(xì)胞系A(chǔ)CC-2生物學(xué)行為的影響。結(jié)果顯示A20基因?qū)ο贅幽倚园┘?xì)胞系A(chǔ)CC-2的生長(zhǎng)起抑制作用；A20基因?qū)?NFκB信號(hào)通路起抑制作用，并抑制NF-κB的激活；A20基因可以降低ACC-2細(xì)胞的轉(zhuǎn)移侵襲能力；A20基因主要通過(guò)減少 P65蛋白在細(xì)胞核中的表達(dá)從而抑制了NF-κB

4、信號(hào)通路的激活，可能是影響ACC-2以上生物學(xué)行為的靶點(diǎn)。
　　應(yīng)用不同濃度的As2O3作用于ACC-M、ACC-2細(xì)胞后，觀察As2O3對(duì)兩種細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的影響。結(jié)果顯示，As2O3抑制 ACC細(xì)胞的生長(zhǎng)，并促進(jìn)細(xì)胞凋亡；As2O3可通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞凋亡使體外培養(yǎng)的ACC-2細(xì)胞生長(zhǎng)受抑制，而受抑制 ACC-2內(nèi) Survivin mRNA和蛋白表達(dá)均下降；As2O3對(duì)人腺樣囊性癌ACC-2裸鼠移植瘤有明顯抑制作用，與常規(guī)化療藥5-

5、Fu相比效果更明顯，其作用機(jī)制可能為降低 Ki-67表達(dá)，抑制腫瘤細(xì)胞增殖活性；降低VEGF表達(dá)及 MVD值，抑制腫瘤血管生成；下調(diào)Survivin基因的表達(dá)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。
　　通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)，證實(shí)了A20基因可以抑制ACC細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，其具體機(jī)制是通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路的激活；As2O3抑制ACC細(xì)胞的生長(zhǎng)，主要是通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡實(shí)現(xiàn)的，其機(jī)制可能是：1.線粒體內(nèi)膜的通透性增加，繼而線粒體跨膜電位下降，促凋亡因子與調(diào)