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文檔簡介
1、研究目的:
觀察β-細(xì)辛醚對不同分化程度胃癌細(xì)胞株體外化療增敏作用;同時(shí)探討β-細(xì)辛醚對胃癌PDKs表達(dá)的調(diào)控與化療增敏機(jī)制的相關(guān)性。
研究方法:
1、采用MTT法觀察β-細(xì)辛醚、順鉑單獨(dú)與聯(lián)合用藥對多種胃癌細(xì)胞株的增殖抑制作用,利用中效原理計(jì)算合用指數(shù)來判定β-細(xì)辛醚和順鉑的協(xié)同增敏作用;使用Real-timePCR方法檢測β-細(xì)辛醚、順鉑單獨(dú)與聯(lián)合作用人胃癌細(xì)胞后對化療藥物相關(guān)基因ERCC1、BRCA1
2、表達(dá)的改變。
2、使用乳酸脫氫酶檢測試劑盒檢測不同濃度β-細(xì)辛醚(120μg·mL-1,60μg·mL-1,30μg·mL-1,15μg·mL-1)以及在Cocl2誘導(dǎo)(200mM24h)的缺氧環(huán)境和H2O2(100mM1h)誘導(dǎo)的有氧環(huán)境下對胃癌細(xì)胞乳酸脫氫酶生成量的影響,以明確β-細(xì)辛醚對PDK1活性的影響。
3、運(yùn)用AnnexinV/PI雙染法研究在Cocl2誘導(dǎo)(200mM24h)的缺氧環(huán)境和H2O2(100
3、mM1h)誘導(dǎo)的有氧環(huán)境下β-細(xì)辛醚對不同分化程度的人胃癌細(xì)胞株凋亡的誘導(dǎo)作用;同時(shí)利用流式細(xì)胞儀檢測對人胃癌細(xì)胞株的周期阻滯效應(yīng)。
4、使用RT-PCR檢測β-細(xì)辛醚對胃癌細(xì)胞有氧糖酵解相關(guān)基因PDK1、PDK4、HIF-1α、c-myc基因的影響。
5、運(yùn)用western blot檢測β-細(xì)辛醚對有氧糖酵解相關(guān)蛋白PDK1、p-PDK1、PDK4、HIF-1α、STAT5、p-STAT5蛋白表達(dá)的影響。
4、 研究結(jié)果:
1、β-細(xì)辛醚作用于不同分化水平的胃癌細(xì)胞株對化療藥物順鉑均有化療增敏作用,其中對MGC-803細(xì)胞株的化療增敏效果最佳;β-細(xì)辛醚可以下調(diào)ERCC1、BRCA1基因表達(dá)。
2、不同濃度的β-細(xì)辛醚作用于胃癌細(xì)胞MGC-803、SGC-7901、MKN-28后,細(xì)胞的乳酸脫氫酶含量受到抑制,且呈濃度相關(guān);不同分化程度胃癌細(xì)胞之間沒有相關(guān)性,缺氧條件下,β-細(xì)辛醚作用后的胃癌細(xì)胞LDH表達(dá)量明顯下降,結(jié)果
5、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3、β-細(xì)辛醚在缺氧及有氧條件下均可以誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞株MGC-803、SGC-7901、MKN-28凋亡,能阻滯胃癌細(xì)胞于G2/M期,且β-細(xì)辛醚作用后呈現(xiàn)明顯亞二倍體峰,提示其有誘導(dǎo)凋亡的作用。
4、β-細(xì)辛醚在缺氧條件下調(diào)胃癌細(xì)胞株P(guān)DK1、PDK4、HIF-1α、c-myc基因的表達(dá)。
5、β-細(xì)辛醚在缺氧條件下可以抑制胃癌細(xì)胞株P(guān)DK1、p-PDK1、PDK4、HIF-1α、STAT
6、5、p-STAT5蛋白表達(dá)的影響。
研究結(jié)論:
1、β-細(xì)辛醚對不同分化水平的胃癌細(xì)胞株均有增殖抑制的作用,且呈濃度相關(guān)性;β-細(xì)辛醚在一定濃度范圍內(nèi)對順鉑化療有化療增敏的作用,其化療增敏作用可能與抑制ERCC1、BRCA1基因表達(dá)有關(guān)。
2、β-細(xì)辛醚可以降低胃癌細(xì)胞乳酸脫氫酶生成量,呈濃度依賴性;β-細(xì)辛醚能降低缺氧條件下胃癌細(xì)胞株的乳酸脫氫酶含量,作用類似于H2O2組,提示其抑制腫瘤機(jī)制可能與抑制腫瘤
7、細(xì)胞有氧糖酵解相關(guān)。
3、缺氧條件下β-細(xì)辛醚可以誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞株凋亡,將阻滯胃癌細(xì)胞于細(xì)胞周期的G2/M期,同時(shí)實(shí)驗(yàn)表明β-細(xì)辛醚作用于不同分化程度胃癌后出現(xiàn)明顯亞二倍體峰,提示其有誘導(dǎo)凋亡的作用。
4、β-細(xì)辛醚能有誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡,其作用可能與抑制PDK1、PDK4、HIF-1α、c-myc基因的表達(dá),下調(diào)PDK1、p-PDK1、PDK4、HIF-1α、STAT5、p-STAT5蛋白表達(dá)有關(guān)。上述基因及蛋白與糖酵
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