利用噬菌體展示技術(shù)淘選α-2,6唾液酸糖模擬肽并檢測(cè)其在Neuro2a細(xì)胞中的生物學(xué)活性.pdf

1、目的:利用噬菌體展示技術(shù)淘選α‐2,6單唾液酸糖的模擬多肽，并檢測(cè)其合成模擬肽在鼠源神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系 Neuro2a細(xì)胞中的生物學(xué)活性。
　　方法:噬菌體展示技術(shù)，ELISA，細(xì)胞培養(yǎng)，蛋白免疫印跡，免疫熒光。
　　結(jié)果：
　　1、接骨木凝集素(SNA)可特異性識(shí)別并結(jié)合α‐2,6單唾液酸糖(6’‐SL)。
　　2、在對(duì) Neuro2a細(xì)胞的增值性檢測(cè)中，伴隨模擬肽濃度的逐步增高(0μg/ml,5μg/ml,1

2、0μg/ml,20μg/ml,100μg/ml)，其作用表現(xiàn)為先促進(jìn)后抑制，類似“拋物線”性關(guān)系，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而隨機(jī)肽組作用無明顯差異。
　　3、在對(duì) Neuro2a細(xì)胞的形態(tài)學(xué)檢測(cè)中，模擬肽與6’‐SL具有類似的生物學(xué)活性，表現(xiàn)為可使胞體圓潤(rùn)，細(xì)胞突起生長(zhǎng)較短；隨機(jī)肽組與空白對(duì)照組則表現(xiàn)為胞體多樣不規(guī)則，細(xì)胞突起生長(zhǎng)較長(zhǎng)；模擬肽組與溶劑對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
　　4、在蛋白質(zhì)免疫印跡

3、檢測(cè)中，模擬肽與6’‐SL在低濃度劑量時(shí)(5μg/ml)，均可降低細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白 Caspase3的表達(dá)，且與對(duì)照組比較時(shí)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);但在高濃度劑量組(20μg/ml)時(shí)對(duì)細(xì)胞凋亡信號(hào)的表達(dá)無差異。
　　5、在免疫熒光染色時(shí)，Ki67信號(hào)在6’‐SL與模擬肽組中多數(shù)細(xì)胞的胞核中表達(dá)，有助于細(xì)胞增殖；神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物 GFAP信號(hào)又在其胞質(zhì)中強(qiáng)度增加，說明此兩者具有誘導(dǎo) Neuros2a細(xì)胞向神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞方向

4、分化的趨勢(shì)。
　　結(jié)論：
　　1、噬菌體展示技術(shù)在淘選糖模擬肽的應(yīng)用上是一種強(qiáng)大生物學(xué)研究工具。
　　2、根據(jù)Bio‐SNA與6’‐SL之間具有識(shí)別、親和特異性，本課題使用以SNA為包被底物通過噬菌體展示技術(shù)所淘選的6’‐SL模擬十二肽的方法步驟簡(jiǎn)便可行，技術(shù)難度要求較易，資源成本消耗較低廉，經(jīng)濟(jì)效價(jià)比較高。
　　3、本實(shí)驗(yàn)的功能性研究表明，唾液酸糖模擬肽與唾液酸、唾液酸糖（6’‐SL）具有部分相似作用，包括在鼠