IL-32誘導(dǎo)TSLP在角膜上皮細(xì)胞免疫炎癥反應(yīng)中的作用.pdf

1、目的：探討白介素-32（Interleukin-32，IL-32）和胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)在人角膜上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用及調(diào)控機(jī)制。
　　方法：（1）不同濃度（2、10、50ng/ml）的IL-32刺激人角膜上皮細(xì)胞，應(yīng)用熒光定量PCR和ELISA檢測(cè)HCECs中TSLP、IL-6、TNFαmRNA和蛋白的表達(dá)變化，同時(shí)用免疫組化技術(shù)定位TSLP蛋白在人角膜上

2、皮組織中的表達(dá)；（2）應(yīng)用Western blot檢測(cè)上述各組角膜上皮細(xì)胞中caspase-1的活性，加入caspase-1抑制劑VX-765后分別應(yīng)用Western blot、熒光定量PCR和ELISA檢測(cè)caspase-1活性、TSLP mRNA和蛋白水平的表達(dá)變化；（3）用同種型IgG抗體（5μg/mL）、TSLP抗體（5μg/mL）、NF-kB抑制劑喹唑啉（NF-kB-I，10μM）以及caspase-1抑制劑VX-765預(yù)處理

3、人角膜上皮細(xì)胞1小時(shí)，然后用IL-32(10ng/mL)刺激HCECs4小時(shí)后應(yīng)用熒光定量PCR檢測(cè)IL-6和TNFαmRNA水平的表達(dá),刺激48小時(shí)后用ELISA檢測(cè)IL-6和TNFα蛋白水平的表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）IL-32刺激人角膜上皮細(xì)胞后可引起TSLP、IL-6、TNFαmRNA和蛋白水平表達(dá)升高，呈一定的時(shí)間和濃度依賴性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），TSLP蛋白在未經(jīng)處理的角膜組織細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，而在經(jīng)IL-32

4、(50 ng/ml)處理48小時(shí)后的供體角膜上皮組織中，TSLP在角膜各層中的表達(dá)均顯著增強(qiáng)；（2）IL-32促進(jìn)caspase-1的活化，并且具有濃度依賴性，加入caspase-1抑制劑后，caspase-1的活性明顯受到抑制，TSLP mRNA和蛋白水平的表達(dá)也明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；（3）TSLP抗體、NF-κB抑制劑喹唑啉和caspase-1抑制劑VX-765能夠顯著抑制IL-32介導(dǎo)的促炎因子（TNFα和I