鴨疫里默氏桿菌氨基糖苷類和喹諾酮類耐藥基因的檢測與序列分析.pdf

1、鴨傳染性漿膜炎是由鴨疫里默氏桿菌(Riemerella anatipestfer, RA)引起的一種急性或慢性敗血性傳染病，主要感染2～8周齡的雛鴨，鵝，火雞及其它家禽和野禽，該病的發(fā)病率和死亡率都很高，對養(yǎng)鴨業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失。目前在防治該病時，由于對抗生素的不合理使用，導致了RA對氨基糖苷類和喹諾酮類等多種抗生素產(chǎn)生了耐藥性，甚至出現(xiàn)了多重耐藥菌株。本試驗通過對實驗室保存的38株RA進行氨基糖苷類和喹諾酮類藥物耐藥性的研究以及耐

2、藥基因的檢測，以便更好的指導臨床用藥。
　　 1、RA對氨基糖苷類和喹諾酮類藥物耐藥表型的研究
　　 本研究采用WHO推薦的K-B紙片法對本實驗室保存的38株RA進行5種氨基糖苷類藥物和4種喹諾酮類藥物的敏感性試驗，并采用CLSI推薦的微量肉湯稀釋法進行慶大霉素、阿米卡星、環(huán)丙沙星和諾氟沙星的最低抑菌濃度(MIC)的測定。藥敏試驗結(jié)果顯示，38株RA對氨基糖苷類藥物即慶大霉素、鏈霉素、阿米卡星、新霉素和卡那霉素的耐藥率分

3、別為76.3％、71.1％、55.3％、50.0％和39.5％;對喹諾酮類藥物即諾氟沙星、環(huán)丙沙星、培氟沙星和氧氟沙星的耐藥率分別為55.3％、52.6％、44.7％和28.9％。其中有33株RA對兩種或多種藥物產(chǎn)生耐藥性，占RA總數(shù)的86.8％，且有2株菌對9種藥物全部耐藥，占RA總數(shù)的5.3％。最低抑菌濃度(MIC)的測定結(jié)果顯示，38株RA對慶大霉素、阿米卡星、諾氟沙星和環(huán)丙沙星的耐藥率分別為63.2％，50％，60.5％和55.

4、3％。以上結(jié)果表明，本實驗室保存的38株RA對多種氨基糖苷類和喹諾酮類藥物耐藥，且多重耐藥的現(xiàn)象比較嚴重。
　　 2、38株RA中氨基糖苷類耐藥基因的檢測及序列分析
　　 本試驗利用PCR方法對38株RA中介導氨基糖苷類藥物耐藥的氨基糖苷類鈍化酶基因(ant(3")-Ⅰa、aac(6')-Ⅰb和aph(3')-Ⅱa)和16S甲基化酶基因（armA、rmtA和mtB）分別進行了檢測和序列的測定與分析。結(jié)果顯示，38株RA中

5、介導氨基糖苷類藥物耐藥的氨基糖苷類鈍化酶基因ant(3")-Ⅰa、aac(6')-Ⅰb和aph(3')-Ⅱa的檢出率分別為31.6％(12/38)、89.5％(34/38)和94.7％(36/38)，與大腸桿菌中同種耐藥基因的同源性分別為96.1％～100％、98.4～100％和98.9％～100％，與沙門氏菌中ant(3")-Ⅰa、aac(6')-Ⅰb兩種耐藥基因的同源性分別為94.3％～100％和98.4～100％。未檢測到介導氨基

6、糖苷類藥物高水平耐藥的16S甲基化酶基因。
　　 3、38株RA中質(zhì)粒介導的喹諾酮類藥物耐藥基因的檢測及序列分析
　　 本試驗利用PCR方法對38株RA中質(zhì)粒介導喹諾酮類藥物耐藥的qnr基因(qnrA、qnrB、qnrC、qnrD和qnrS)，QepA基因和oqxAB基因分別進行了檢測和序列測定與分析。結(jié)果表明，38株RA中由質(zhì)粒介導的喹諾酮類藥物耐藥基因僅檢測到qnrS基因，檢出率為28.9％(11/38)，與大腸桿菌