G-CSF克服骨髓基質(zhì)細(xì)胞對(duì)白血病細(xì)胞的保護(hù)作用.pdf

1、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文1上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文GCSF克服骨髓基質(zhì)細(xì)胞對(duì)白血病細(xì)胞的保護(hù)作用關(guān)鍵詞GCSF，miR146a，CXCR4，Smad4，骨髓微環(huán)境，化療敏感性研究生姓名李昕學(xué)號(hào)1137219304學(xué)科專業(yè)內(nèi)科（血液病學(xué)）指導(dǎo)教師鐘華導(dǎo)師小組成員陳芳源主任醫(yī)師鐘濟(jì)華主任技師沈莉菁副主任醫(yī)師徐嵐主治醫(yī)師萬海霞博士研究方向惡性血液病的治療及表觀遺傳調(diào)控資助基金項(xiàng)目國家自然科學(xué)基金（編號(hào)：81270626）上海市自然

2、科學(xué)基金（編號(hào)：13ZR1425000）申請(qǐng)學(xué)位類別碩士學(xué)位培養(yǎng)單位上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院答辯日期2016年4月21日上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文3GCSF打破骨髓基質(zhì)細(xì)胞對(duì)白血病細(xì)胞的保護(hù)作用摘要研究目的以人急性髓系白血病HL60、THP1細(xì)胞株為研究對(duì)象構(gòu)建白血病體外研究的模型，旨在研究GCSF如何通過調(diào)控miR146aCXCR4和miR146aSmad4信號(hào)通路影響處于骨髓微環(huán)境保護(hù)中的白血病細(xì)胞增殖活性，細(xì)胞周期及趨化

3、能力等細(xì)胞生物學(xué)行為，闡釋GCSF增強(qiáng)化療藥物對(duì)白血病細(xì)胞殺傷作用的分子機(jī)制，并結(jié)合臨床數(shù)據(jù)分析GCSF對(duì)急性髓性白血病病人總生存率和無復(fù)發(fā)生存率的影響，探討CXCR4和miR146a作為臨床標(biāo)志物的可能性及對(duì)于疾病預(yù)后的預(yù)測(cè)意義。實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果第一部分人急性髓系白血病HL60、THP1細(xì)胞株中轉(zhuǎn)染miR146a過表達(dá)及抑制表達(dá)質(zhì)粒，經(jīng)GCSF100ngml預(yù)處理48h或不做任何處理后，用RTqPCR法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)miR146a、CXCR

4、4mRNA表達(dá)情況，WesternBlotting法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)總CXCR4蛋白表達(dá)情況，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)表面CXCR4蛋白表達(dá)，PIAnnexinV雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況，通過建立HS5白血病細(xì)胞共培養(yǎng)模型模擬骨髓微環(huán)境與白血病細(xì)胞之間的相互作用，驗(yàn)證骨髓基質(zhì)細(xì)胞對(duì)白血病細(xì)胞的保護(hù)作用，并通過構(gòu)建transwell小室模型，比較不同組別間的細(xì)胞趨化能力。結(jié)果表明，GCSF可以通過上調(diào)miR146a的水平降低白血病細(xì)胞內(nèi)CXCR4表達(dá)，從而

5、增加細(xì)胞的趨化，最終增加阿糖胞苷對(duì)其殺傷作用。第二部分人白血病HL60細(xì)胞株中轉(zhuǎn)染miR146a過表達(dá)及抑制表達(dá)質(zhì)粒后，經(jīng)GCSF100ngml預(yù)處理48h或不做任何處理后，用RTqPCR法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Smad4mRNA的表達(dá)，WesternBlotting法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Smad4蛋白表達(dá)，CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，PIAnnexinV雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期變化。結(jié)果表明，經(jīng)GCSF處理后，HL60細(xì)胞內(nèi)miR14