使用抗雄激素藥物HF或ASC-J9_可以提高BCG的治療效果抑制膀胱癌的進展.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:對于高危非肌層浸潤性膀胱(NMIBC)癌患者,卡介苗(BCG)膀胱灌注免疫治療一直是標準的一線治療方案,但是BCG免疫治療存在很多局限。最近有研究發(fā)現(xiàn)雄激素受體(AR)以及雄激素信號通路在膀胱癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用。本研究試圖聯(lián)合應用BCG和抗雄激素藥物,通過細胞實驗和動物實驗來探討B(tài)CG和抗雄激素藥物聯(lián)用是否能夠更好的抑制膀胱癌的進展及其作用機制。
  方法:⑴Western-Blot檢測T24細胞及253J細胞

2、中AR的表達水平;⑵設置各實驗組:單獨應用 BCG組,BCG聯(lián)合應用抗雄激素藥物羥基氟他胺(HF)組,BCG聯(lián)合應用雄激素降解劑二甲基姜黃素(ASC-J9?)組,分別用上述各組處理T24及253J細胞,用普通PCR法檢測膀胱癌細胞BCG的表達情況;用Q-PCR法檢測膀胱癌細胞整合蛋白α5、β1的mRNA的表達情況;⑶通過細胞遷移實驗驗證經(jīng)過不同處理的(單獨應用BCG或與抗雄激素藥物聯(lián)用)膀胱癌細胞募集單核細胞 THP-1細胞的能力:將數(shù)

3、量大致相同的膀胱癌細胞鋪到Transwell的下室中,經(jīng)過BCG或者BCG聯(lián)合抗雄激素藥物處理后,上室中加入數(shù)量大致相同的 THP-1細胞,培養(yǎng)2小時后收集下室培養(yǎng)基,計數(shù)其中的THP-1細胞數(shù)量作比較;將T24細胞及253J細胞做不同的處理后,檢測了膀胱癌細胞分泌的有關免疫反應的細胞因子,如 IL-2,IL-4,IL-6,IL-10,CCL-2等的表達情況,對比產(chǎn)生的變化;⑷對THP-1細胞使用不同的實驗條件處理(單獨應用BCG或與抗

4、雄激素藥物聯(lián)用),通過Elisa檢測不同條件下THP-1細胞TNF-α的分泌情況;提取經(jīng)過不同處理的THP-1的細胞培養(yǎng)基處理膀胱癌細胞系,使用MTT檢測膀胱癌細胞的生存能力差異。⑸根據(jù)血尿程度將小鼠隨機分為四組,分別是BCG組、ASC-J9?組、BCG+ASC-J9、對照組,每組十只。⑹通過不同實驗條件處理小鼠,處理完成后每組分別處死五只小鼠,取膀胱制成蠟塊,行HE染色觀察小鼠膀胱上皮細胞形態(tài),行BrdU染色觀察小鼠膀胱上皮細胞增殖情

5、況,行F4/80免疫組化染色觀察巨噬細胞局部浸潤情況;⑺繼續(xù)飼養(yǎng)每組剩余五只小鼠,觀察其生存率的差異。
  結果:①在T24細胞及253J細胞中,都有AR表達;使用5μM ASC-J9處理細胞后,AR的表達水平降低;②分別用不同條件處理T24及253J細胞后,用普通PCR法檢測膀胱癌細胞BCG的表達可見當BCG與HF或ASC-J9聯(lián)用后,膀胱癌細胞中BCG的表達有所升高,且升高將近2倍;使用Q-PCR檢測膀胱癌細胞中整合蛋白α5、

6、β1的mRNA的表達可見BCG與HF或ASC-J9聯(lián)用后,整合蛋白α5、β1的 mRNA的表達升高;③通過細胞遷移實驗可見,當 BCG與HF或ASC-J9?聯(lián)用處理膀胱癌細胞后,可以引起更多的THP-1細胞遷移向腫瘤細胞;使用Q-PCR檢測使用不同條件處理膀胱癌細胞后,相關免疫分子mRNA的表達情況,可見IL-6的表達在BCG與HF或ASC-J9聯(lián)用后升高,差異有統(tǒng)計學意義;④通過Elisa實驗可見,用BCG與HF或ASC-J9聯(lián)用處理

7、THP-1細胞后,可使THP-1細胞分泌更多的TNF-α;提取經(jīng)過不同處理的THP-1細胞的培養(yǎng)基,用來培養(yǎng)膀胱癌細胞,通過MTT可見BCG與HF或ASC-J9?聯(lián)用處理THP-1的培養(yǎng)基培養(yǎng)膀胱癌細胞,可使膀胱癌細胞的生存能力明顯降低。⑤通過應用HE染色我們發(fā)現(xiàn),對照組和 ASC-J9?組小鼠膀胱出現(xiàn)了尿路上皮乳頭狀癌和原位癌,BCG組小鼠膀胱切片可見少量的尿路上皮癌及少量的非典型增生,BCG+ASC-J9?組小鼠僅見少量的非典型增生

8、,很少發(fā)現(xiàn)膀胱癌細胞;⑥與BCG組及ASC-J9組相比,對照組表達BrdU的膀胱尿路上皮細胞數(shù)目最多,而BCG+ ASC-J9?組達BrdU的膀胱尿路上皮細胞數(shù)目最少;⑦與對照組相比, BCG組及 ASC-J9 F4/80陽性細胞數(shù)相對較多,而 BCG+ASC-J9組F4/80陽性細胞數(shù)目最多;⑧小鼠生存率:對照組小鼠平均生存31.12±2.28周;ASC-J9組小鼠平均生存31.83±2.36周,與對照組相比沒有統(tǒng)計學差異;BCG組小

9、鼠平均生存35.64±2.73周,與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義;BCG+ASC-J9組小鼠平均生存39.67±3.56周,與對照組相比有統(tǒng)計學意義。
  結論:⑴與單獨應用BCG相比,羥基氟他胺(HF)或者ASC-J9?與BCG連用提高了BCG與腫瘤細胞的接觸、內(nèi)化能力,從而更好地抑制腫瘤細胞生長;⑵羥基氟他胺(HF)或者ASC-J9治療增加了腫瘤細胞白介素6(IL-6)的釋放,從而可以募集更多的單核細胞/巨噬細胞,通過分泌更多的

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