FBXW7在腎癌細(xì)胞凋亡機(jī)制中的初步研究.pdf

1、研究目的:（1）探究腎癌組織和癌旁組織中 FBXW7表達(dá)情況。探討FBXW7在腎癌組織和癌旁組織中有無(wú)差異，以及對(duì)病人預(yù)后的影響。
　　（2）通過(guò) CCK8、平板克隆實(shí)驗(yàn)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡，檢測(cè)過(guò)表達(dá)FBXW7的腎癌細(xì)胞系的細(xì)胞活力和增殖能力。
　?。?）通過(guò)qPCR、Western blot來(lái)探究FBXW7和c-myc，c-Jun之間的關(guān)系。
　　方法：收集105例來(lái)自于中山大學(xué)腫瘤醫(yī)院和暨南大學(xué)華僑醫(yī)院

2、2008年到2012年腎癌和對(duì)應(yīng)的癌旁組織的病理樣本，應(yīng)用免疫組化技術(shù)，對(duì)樣本進(jìn)行染色，通過(guò)樣本染色的深淺來(lái)判斷 FBXW7表達(dá)量的多少。通過(guò) qPCR來(lái)檢測(cè)腎癌細(xì)胞系 ACHN，A704對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組FBXW7的mRNA表達(dá)量。用Western blot來(lái)檢測(cè)腎癌細(xì)胞系A(chǔ)CHN， A704對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組 FBXW7的蛋白表達(dá)的量，以及 c-myc，c-Jun的蛋白表達(dá)的量。通過(guò)平板克隆、CCK8等功能實(shí)驗(yàn)比較對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞克隆數(shù)

3、，以及OD值，還有細(xì)胞的凋亡和細(xì)胞周期的變化來(lái)判斷高表達(dá)FBXW7對(duì)腎癌細(xì)胞的增殖能力的影響。
　　結(jié)果：病理樣本免疫組化檢測(cè)蛋白表達(dá)發(fā)現(xiàn)，癌組織多呈淡染，癌旁組織多呈深染，通過(guò)免疫組化積分比較（P<0.0001）這表明癌組織中FBXW7表達(dá)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于癌旁正常組織。腎透明細(xì)胞癌FBXW7低表達(dá)組（n=22）和高表達(dá)組(n=59)的術(shù)后的生存。高表FBXW7組的生存率要明顯好于低表達(dá)組（log-rank test,P<0.001）。通

4、過(guò)western和Real-Time qPCR在細(xì)胞系中的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染FBXW7質(zhì)粒的ACNH， A704細(xì)胞FBXW7 mRNA和蛋白比對(duì)照組明顯增多，而c-myc，c-Jun蛋白比對(duì)照組明顯減少。轉(zhuǎn)染入FBXW7質(zhì)粒的細(xì)胞450nm波長(zhǎng)的吸光度值明顯要低于轉(zhuǎn)染入空質(zhì)粒的對(duì)照組，細(xì)胞增殖活力明顯變?nèi)?Vector vs Plasmid A704：1.327±0.036vs1.035±0.042 P<0.05；ACHN：1.403±0

5、.024vs1.166±0.029 P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞克隆數(shù)超過(guò)50個(gè)的數(shù)量明顯少于對(duì)照組，轉(zhuǎn)入FBXW7質(zhì)粒的細(xì)胞的增殖能力受到了明顯的抑制。（Vector vs Plasmid ACHN：567±19 vs412±21 P<0.05；A704：279±13 vs144±7 P<0.05）。流式細(xì)胞儀用PI法檢測(cè)細(xì)胞周期，高表達(dá)FBXW7的ACHN,A704 G0/G1期所占的比例要高于對(duì)照組（Vector vs Plasmi

6、d ACHN51.93％ vs63.25% P<0.05；A70460.31%vs68.32% P<0.05）。高表達(dá)FBXW7的ACHN,A704細(xì)胞早期和晚期凋亡比對(duì)照組多（Vector vs Plasmid ACHN5.1%vs8.5% P<0.05；A70414.1%vs20.4% P<0.05）
　　結(jié)論：（1） FBXW7在癌組織中表達(dá)水平低于癌旁組織，高表達(dá)FBXW7的腎癌細(xì)胞系的活力和增殖能力明顯低于對(duì)照組。腎透明