尼克酰胺對腎癌細(xì)胞的影響及其分子機(jī)制的研究.pdf

1、背景及目的:
　　腎細(xì)胞癌(簡稱腎癌)是常見的惡性腫瘤之一，約占腎臟腫瘤的90％~95%，其發(fā)病率在泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤中僅次于膀胱癌。腎癌侵襲和轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)，且對化、放療及傳統(tǒng)免疫治療均不敏感，患者預(yù)后較差，故對腎癌治療藥物的研究已經(jīng)成為一項熱門課題。研究表明尼克酰胺在腫瘤中有抑制腫瘤細(xì)胞的增殖等重要作用，而尼克酰胺對腎癌作用目前國內(nèi)的研究少有報道。本研究探討尼克酰胺對腎癌786-0細(xì)胞的增殖、相關(guān)蛋白表達(dá)、細(xì)胞凋亡及其侵襲和遷移作用

2、的影響，為臨床上尼克酰胺成為治療腎癌的新型抗腫瘤藥物提供新的科學(xué)依據(jù)。
　　材料和方法:
　　1.用含10%胎牛血清，100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)人腎癌768-0細(xì)胞株。
　　2.將細(xì)胞用0.25%的胰酶消化，以每孔80000個細(xì)胞接種于3個12孔板上。每個孔約l mL培養(yǎng)液并且分為含有尼克酰胺的終濃度為10、20、30 mmol／L組，以未處理細(xì)胞為對照組，待融合度到70%-80%時

3、候開始處理細(xì)胞，分別于12、24、48 h進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。計算原細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù)：(細(xì)胞密度)：(細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù)）/mL＝（4個大格子細(xì)胞數(shù)/4)×104×稀釋倍數(shù)。
　　3.將生長狀態(tài)良好的786-0細(xì)胞接種至12孔培養(yǎng)板，在含10%胎牛血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h，待細(xì)胞長至70%~80%時，更換10%胎牛血清的培養(yǎng)基，同時分別加入10、20、30 mmol／L濃度的尼克酰胺繼續(xù)培養(yǎng)24 h，以未處理細(xì)胞為對照組。收集細(xì)胞，利用

4、AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法細(xì)胞凋亡檢測試劑盒染色，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測細(xì)胞凋亡。
　　4.細(xì)胞接種于10cm培養(yǎng)皿中，待融合度到70%-80%時候開始加藥，用含不同濃度(10、20、30mmol／L)尼克酰胺處理腎癌768-0細(xì)胞24h，以未處理細(xì)胞為對照組，用Western Blot檢測SIRT1蛋白及p53蛋白的表達(dá)量。
　　5.細(xì)胞接種于6cm培養(yǎng)皿中，待融合度到70%-80%時候開始加藥，用含不同濃度(1

5、0、20、30mmol／L)尼克酰胺處理腎癌768-0細(xì)胞24h，以未處理細(xì)胞為對照組，用transwell和BD Matrigel Invasion Chamber小室分別檢測尼克酰胺對腎癌768-0細(xì)胞遷移、侵襲的影響。
　　6.實驗數(shù)據(jù)分析和處理：用GraphPad Prism5.0軟件，所有數(shù)據(jù)均使用單因素方差分析的Newman-Keul's檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　實驗結(jié)果:
　　1.尼克酰胺抑制腎癌786-