NOX通路在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞凋亡中作用初步研究.pdf

1、目的：
　　觀察不同類型宮頸癌細(xì)胞的氧化應(yīng)激狀態(tài)，探討NOX通路在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的宮頸癌細(xì)胞凋亡中的作用。
　　方法：
　　流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測四株不同HPV類型宮頸癌細(xì)胞內(nèi)在的總活性氧(ROS)水平及 DPI處理前后不同類型宮頸癌細(xì)胞內(nèi)線粒體途徑和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（NOXs）途徑ROS水平；DPI預(yù)處理H2O2作用后流式檢測不同類型宮頸癌細(xì)胞凋亡率。ELISA法檢測四株不同HPV類型宮頸癌細(xì)胞培養(yǎng)上清

2、中TGF-?的含量。合成并轉(zhuǎn)染NOX4序列特異性siRNA，免疫印跡法檢測TGF-?處理前后Nox4蛋白表達(dá)變化， FCM檢測處理前后宮頸癌細(xì)胞株ROS水平。
　　結(jié)果：
　　HPV陽性宮頸癌細(xì)胞株內(nèi)在ROS水平高于HPV陰性宮頸癌細(xì)胞株（P<0.05），提示HPV陽性宮頸癌胞內(nèi)處于促氧化環(huán)境。但兩類宮頸癌細(xì)胞株線粒體途徑來源ROS水平比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），NOX途徑抑制劑DPI處理后，與HPV陰性宮頸癌細(xì)胞株相

3、比，HPV陽性宮頸癌細(xì)胞株內(nèi)在 ROS水平明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明NOX通路是HPV陽性宮頸癌細(xì)胞ROS的主要來源。100μmol/L H2O2處理后HPV陽性宮頸癌細(xì)胞凋亡率明顯高于HPV陰性細(xì)胞組及DPI預(yù)處理組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示促氧化治療可能更好地殺傷宮頸癌細(xì)胞。HPV陽性宮頸癌細(xì)胞株培養(yǎng)上清中TGF-β量明顯高于HPV陰性細(xì)胞株，5 ng/mL TGF-β處理不同類型宮頸癌細(xì)胞株

4、4 h或8 h，HPV陽性宮頸癌細(xì)胞株內(nèi)在ROS水平高于對(duì)照組，TGF-β引起的Nox4蛋白表達(dá)增加，具有時(shí)間依賴性，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），HPV陰性宮頸癌細(xì)胞株內(nèi)在ROS水平處理前后無明顯差異。轉(zhuǎn)染NOX4序列特異性siRNA后，HPV陽性宮頸癌細(xì)胞株(HeLa細(xì)胞)Nox4蛋白表達(dá)降低，內(nèi)在基礎(chǔ)ROS水平降低至對(duì)照的60％左右，4 h或8 h時(shí)間點(diǎn)TGF-β引起的ROS變化明顯低于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.0