噴墨打印制備層粘蛋白梯度及其對內皮細胞取向性影響的研究.pdf

1、內皮細胞的遷移和取向排列在血管生理、病理活動中扮演極為重要的角色。臨床外科手術后的傷口愈合、內皮損傷區(qū)的再內皮細胞化及植入體在植入宿主后的微循環(huán)血管新生，都伴隨著內皮細胞的遷移和取向生理過程?；瘜W趨觸性(chemotaxis)是調控該生理過程的途徑之一?；瘜W趨觸性指細胞沿化學因子濃度梯度方向的運動或取向。
　　 為了研究材料表面蛋白密度對內皮細胞取向的影響，本文提出了利用噴墨打印技術在噴金基材表面構建層粘蛋白梯度的新方法。本文對

2、該制備過程及蛋白梯度形成進行了很好地優(yōu)化及表征。并利用從人臍靜脈中分離的內皮細胞接種到梯度基材表面進行了細胞取向研究。全文包括如下三方面的具體研究工作：
　　 1.層粘蛋白梯度制備的新方法：首先，利用改裝后的噴墨打印機根據程序設計的梯度圖案在鍍金基材表面打印11-巰基十一烷酸功能性硫醇(MUA)；然后，反浸另一種11-巰基十一醇(MUD)溶液，得到帶梯度濃度羧基(COOH)官能團的自組裝單分子層。羧基官能團被活化后與層粘蛋白共價

3、鍵結合，從而得到表面密度層粘蛋白梯度。我們利用接觸角、X-射線光電子能譜儀(XPS)及激光共聚焦(CLSM)對單分子層和層粘蛋白梯度進行了優(yōu)化和表征，結果證實：我們成功構建了連續(xù)性層粘蛋白梯度。
　　 2.從人臍靜脈體外消化、分離血管內皮細胞，用含20％FBS、0.35g/L谷氨酰胺的RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng).通過倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)及免疫細胞化學染色檢測等方法對細胞進行鑒定。結果顯示：本方法分離、純化得到的細胞有內皮細胞

4、Ⅷ因子表達，且具有較高的細胞活性，是一種從人臍靜脈獲得原代內皮細胞的有效方法。
　　 3.分別將內皮細胞接種到30mm長的梯度層粘蛋白表面和均一層粘蛋白表面進行培養(yǎng)，24h后進行細胞骨架和細胞核染色。激光共聚焦顯微鏡觀察表明：內皮細胞接種到層粘蛋白梯度上時，層粘蛋白密度最大的區(qū)域分布了最多的內皮細胞，黏附細胞數量隨著層粘蛋白密度降低而減少；而在均一層粘蛋白表面，內皮細胞分布均勻。內皮細胞在層粘連梯度上沿梯度徑向具有明顯的趨化性，