17β-雌二醇介導(dǎo)Hsp27在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及其分子機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討17β-雌二醇對(duì)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞Hsp27表達(dá)的影響及分子機(jī)制。
　　方法：用10-8 mol/L的17β-雌二醇（E2）處理K1和BCPAP細(xì)胞不同時(shí)間，Real-time PCR檢測細(xì)胞中Hsp27 mRNA的表達(dá)，Western blot檢測細(xì)胞中Hsp27蛋白的表達(dá)；分別用E2、PPT（ERα激動(dòng)劑）和DPN（ERβ激動(dòng)劑）處理K1和BCPAP細(xì)胞，Western blot檢測細(xì)胞中Hsp27蛋白的表達(dá)；設(shè)計(jì)合

2、成ERαsiRNA、ERβsiRNA并轉(zhuǎn)染K1和BCPAP細(xì)胞，Western blot檢測細(xì)胞中ERα、ERβ和Hsp27蛋白的表達(dá)；ChIP檢測ERα、ERβ對(duì)Hsp27基因啟動(dòng)子的影響；MTT檢測細(xì)胞存活率；酶標(biāo)分析儀檢測caspase-3活性；免疫共沉淀檢測細(xì)胞中Hsp27與Procaspase-3的相互作用。
　　結(jié)果：用10-8 mol/L的E2處理K1和BCPAP細(xì)胞不同時(shí)間，隨著E2處理時(shí)間增加，K1和BCPAP細(xì)

3、胞中Hsp27的mRNA和蛋白表達(dá)水平逐漸增高，在24 h達(dá)到峰值（P＜0.05）。PPT促進(jìn)Hsp27蛋白的表達(dá)（P＜0.05），DPN抑制Hsp27蛋白的表達(dá)（P＜0.05）。E2作用轉(zhuǎn)染ERαsiRNA的K1和BCPAP細(xì)胞24 h，與E2處理組相比，Hsp27蛋白的表達(dá)水平降低（P＜0.05）；E2作用轉(zhuǎn)染ERβsiRNA的K1和BCPAP細(xì)胞24 h，與E2處理組相比，Hsp27蛋白的表達(dá)水平升高（P＜0.05）。ChIP結(jié)果

4、顯示 ERα能夠與 Hsp27基因啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合。MTT和caspase-3活性檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)E2通過ERα誘導(dǎo)Hsp27的上調(diào)，可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖，同時(shí)可以抵抗TNF-α引起的細(xì)胞凋亡（P＜0.05）。E2分別作用轉(zhuǎn)染ERαsiRNA和Hsp27 siRNA的K1和BCPAP細(xì)胞24 h，與E2處理組相比，Hsp27與Procaspase-3的相互作用均減弱。
　　結(jié)論：17β-雌二醇可以通過ERα促進(jìn)K1和BCPAP細(xì)胞中Hsp