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文檔簡介
1、內源性病毒片段是古代病毒感染宿主后遺留在宿主基因組并隨之穩(wěn)定遺傳的古代病毒基因組片段。考古病毒學的主要目的是研究古代存活、現(xiàn)在滅絕的病毒對現(xiàn)存宿主基因組的影響。目前在哺乳動物中尚未發(fā)現(xiàn)內源性嗜肝DNA病毒片段,但在斑胸草雀等鳥類中發(fā)現(xiàn)了內源性嗜肝DNA病毒片段。然而這些片段都較短不足以恢復古代嗜肝DNA病毒的任何一個基因或元件。
本研究使用嗜肝DNA病毒科13種代表病毒株的聚合酶(Pol)氨基酸序列進行tBLASTn比對數(shù)據(jù)庫
2、中157種后生動物基因組。首次在虎皮鸚鵡基因組中檢測到陽性信號。因為現(xiàn)存鸚鵡乙肝病毒(PHBV)的Pol氨基酸序列在初次篩選中獲得最好匹配,隨后對虎皮鸚鵡基因組序列使用PHBV的Pol和PreC/C的氨基酸序列進行再次tBLASTn分析,在虎皮鸚鵡基因組的49個重疊群中發(fā)現(xiàn)61條內源性嗜肝DNA病毒片段,命名為內源性虎皮鸚鵡乙肝病毒片段(eBHBV)。
絕大部分eBHBV序列只包含不完整病毒基因組片段,但其中兩條eBHBV接近
3、和超過病毒基因組全長序列:eBHBV1全長約3.9 kb,包含1.3拷貝基因組全長序列,兩端為Pol和PreC/C冗余序列;eBHBV2全長約3.1 kb,包含約1.0拷貝基因組全長序列,兩端為PreC/C。通過PCR克隆測序和Southern雜交驗證了虎皮鸚鵡基因組中確實包含eBHBV1和eBHBV2。
根據(jù)現(xiàn)存嗜肝DNA病毒復制模型,Pol的TP蛋白、epsilon包裝信號和DR序列對病毒的復制極為關鍵,有趣的是在eBHB
4、V1和eBHBV2中這些元件得到保留。
系統(tǒng)發(fā)生分析表明,eBHBV1和eBHBV2與所有現(xiàn)存禽嗜肝DNA病毒相比,已經成為一個獨立的進化分支,但與斑胸草雀中的內源性嗜肝DNA病毒片段(eZHBVj)相比,eBHBV1和eBHBV2與所有現(xiàn)存禽嗜肝DNA病毒之間親緣關系更近,意味著古代虎皮鸚鵡嗜肝DNA病毒(BHBV)可能同現(xiàn)存禽嗜肝DNA病毒擁有共同祖先。
通過對eBHBV1中0.3拷貝直接重復序列的遺傳距離進行分
5、析,可以推測出eBHBV1整合到虎皮鸚鵡基因組中約為250-500萬年。這比之前認為的現(xiàn)存禽嗜肝DNA病毒共同祖先小于6000年要早得多。通過PCR克隆測序和Southern雜交在虎皮鸚鵡近親物種黑冠吸蜜鸚鵡的基因組中沒有檢測到eBHBV的直系同源序列,因而可以認為eBHBV的最大整合年齡不超過兩個物種的分歧時間即1400萬年。
體外細胞水平的研究發(fā)現(xiàn)eBHBV1和eBHBV2具有轉錄活性。而在虎皮鸚鵡肝組織內也能檢測到eBH
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