版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、正常肝臟在各種慢性肝病損傷下,引起持續(xù)或反復(fù)的肝實質(zhì)炎癥壞死,使得纖維結(jié)締組織大量增生,而其降解相對不足,大量細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)沉積形成肝纖維化,進(jìn)一步進(jìn)展則導(dǎo)致肝硬化的發(fā)生。如果能給予有效的治療,則已經(jīng)形成的肝纖維化可以逆轉(zhuǎn)。肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cells,HSC)由靜息態(tài)被激活是肝纖維化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)和細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ),活化的HSC能合成和分泌ECM,導(dǎo)致ECM在肝內(nèi)過量沉
2、積。
轉(zhuǎn)化生長因子pi(transforming growth factor beta l,TGFpi)能夠促進(jìn)HSC轉(zhuǎn)變?yōu)榧〕衫w維樣細(xì)胞,增加細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生,減少基質(zhì)的降減,并抑制肝細(xì)胞再生及誘導(dǎo)凋亡,在肝纖維化的發(fā)生中起到重要作用,被認(rèn)為是目前最強(qiáng)的致纖維化因子。
胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白l(insulin-like growth factor binding protein related p
3、rotein 1,IGFBPrPI)是一種可溶性的分泌性蛋白質(zhì)。導(dǎo)師劉立新前期研究發(fā)現(xiàn),IGFBPrPI在肝纖維化和肝硬化患者肝組織中高表達(dá),并且與TGFpi的高表達(dá)和膠原合成的增多呈正相關(guān):外源性重組TGFpi作用于體外培養(yǎng)的HSC后,可使IGFBPrPI蛋白的產(chǎn)生增多;抗IGFBPrPI抗體可以抑制TAA誘導(dǎo)的肝纖維化小鼠肝組織中TGFpi的產(chǎn)生。有研究表明,0.05-O.lμg/L濃度的外源性重組TGFβ1作用于兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞時,
4、可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖,內(nèi)源性TGFpi基因在兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞中過表達(dá)后,細(xì)胞增殖受到抑制,提示不同來源的TGFβ1對同一細(xì)胞的生理作用會有不同的影響。為了明確內(nèi)源性TGFβ1對肝星狀細(xì)胞中IGFBPrPI表達(dá)的影響及其可能的意義,設(shè)計了本課題。
目的:
明確內(nèi)源性轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)βl對肝星狀細(xì)胞中胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白I(IGFBPrPI)表達(dá)的影響及其可能的意義。
方法:
5、 1.轉(zhuǎn)染效率檢測
使用帶熒光的陰性質(zhì)粒pEGFP-NI轉(zhuǎn)染人肝星狀細(xì)胞LX-2后48h,熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率。
2.內(nèi)源性TGFpi基因過表達(dá)
將LX-2分為3組:空白對照組:加入等量不含血清及抗生素的RPMl-1640培養(yǎng)液;陰性質(zhì)粒組:轉(zhuǎn)染陰性對照質(zhì)粒;TGFpi過表達(dá)組:轉(zhuǎn)染TGFβl過表達(dá)質(zhì)粒。轉(zhuǎn)染后不同時間(24h、48h、72h),采用Real-timePCR法檢測TGFβ
6、l、CollagenImRNA的表達(dá);轉(zhuǎn)染后72h,采用Westemblot法檢測細(xì)胞上清液中TGFβl、CollagenI蛋白的表達(dá)。
3.內(nèi)源性TGFpi對IGFBPrP1表達(dá)的影響
LX-2分組及處理同前,轉(zhuǎn)染后不同時間(24h、48h、72h),采用Real-time PCR法檢測IGFBPrPImRNA的表達(dá);轉(zhuǎn)染后72h,采用Western blot法檢測細(xì)胞胞漿中IGFBPrPI蛋白的表達(dá)。
7、r> 結(jié)果:
1.細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率
轉(zhuǎn)染后48h,熒光顯微鏡下觀察,可見綠色熒光,說明轉(zhuǎn)染成功,計算質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率達(dá)40%。
2.TGFpi、Collagenl mRNA及蛋白的表達(dá)
Real-time PCR檢測結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染后24h,TGFβl過表達(dá)組(32.22±0.39)TGFpl mRNA的表達(dá)顯著高于空白對照組(1)及陰性質(zhì)粒組(7.98±0.12),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(
8、P<O.OI),TGFpi過表達(dá)組(1.92±0.04)CollagenI mRNA的表達(dá)與陰性質(zhì)粒組(1.99±0.07)差別不明顯(P>0.05);轉(zhuǎn)染后48h,TGFβ1過表達(dá)組(63.12+0.44)TGFpi mRNA的表達(dá)顯著高于空白對照組(1)及陰性質(zhì)粒組(l.Ol±0.01),TGFpi過表達(dá)組(2.00±0.06)CollagenI mRNA的表達(dá)顯著高于空白對照組(l)及陰性質(zhì)粒組(1.02±0.01),差異均有統(tǒng)計
9、學(xué)意義(P值均<0.01);轉(zhuǎn)染后72h,TGFpi過表達(dá)組(38.46±0.19)TGFpi mRNA的表達(dá)顯著高于空白對照組(1)及陰性質(zhì)粒組(1.05±0.01),TGFpi過表達(dá)組(8.63+0.15)CollagenI mRNA的表達(dá)顯著高于空白對照組(1)及陰性質(zhì)粒組(1.03±0.02),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均<0.01)。Western blot檢測結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染后72h,TGFβl過表達(dá)組(0.27±0.04)TG
10、Fpi蛋白的表達(dá)明顯高于空白對照組(0.20βO.OI)及陰性質(zhì)粒組(0.22β0.01),TGFpi過表達(dá)組(1.47±0.02)CollagenI蛋白的表達(dá)明顯高于空白對照組(0.76±0.03)及陰性質(zhì)粒組(0.77±0.02),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均<0.05)。
3.IGFBPrPI mRNA及蛋白的表達(dá)
Real-time PCR檢測結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染后24h,TGFpi過表達(dá)組(4.33±0.3
11、8)IGFBPrPI mRNA的表達(dá)顯著高于空白對照組(l)及陰性質(zhì)粒組(2.86±0.09);轉(zhuǎn)染后48h,TGFpi過表達(dá)組(1.4l±O.11)IGFBPrPI mRNA的表達(dá)顯著高于空白對照組(1)及陰性質(zhì)粒組(1.07±0.16);轉(zhuǎn)染后72h,TGFβl過表達(dá)組(2.56±0.30)IGFBPrPI mRNA的表達(dá)顯著高于空白對照組(l)及陰性質(zhì)粒組(l.Oo±0.10),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均<0.Ol)。Wester
12、n blot檢測結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染后72h,TGFpi過表達(dá)組(0.53±O.OI)IGFBPrPI蛋白的表達(dá)明顯高于空白對照組(0.25±0.02)及陰性質(zhì)粒組(0.27±0.03),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:
內(nèi)源性TGFpi可引起LX-2過表達(dá)TGFβl和CollagenI mRNA及蛋白,同時亦可以增加IGFBPrPI mRNA及蛋白的表達(dá)。推測IGFBPrPI與致肝纖維化最強(qiáng)的因子TGF
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 外源性TGF-β3對大鼠肝星狀細(xì)胞內(nèi)源性TGF-β3表達(dá)及其增殖的影響.pdf
- TGF-β1抗體對肝星狀細(xì)胞Ⅰ型膠原及TIMP-1基因表達(dá)的影響.pdf
- 舒肝顆粒對大鼠肝星狀細(xì)胞α-SMA、TNF-α、TGF-β-,1-表達(dá)的影響.pdf
- 纈草萜內(nèi)酯對肝星狀細(xì)胞增殖及表達(dá)I型膠原與TGFβ1的影響.pdf
- Toll樣受體4內(nèi)源性配體對肝星狀細(xì)胞生物學(xué)活性的影響的研究.pdf
- 甲基蓮心堿對TGF-β1誘導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞增殖及gremlin表達(dá)的影響.pdf
- 白介素-10對TGFβ-,1-誘導(dǎo)的大鼠肝星狀細(xì)胞表達(dá)CTGF及TIMP-1的影響.pdf
- HBx對肝癌細(xì)胞內(nèi)源性Survivin表達(dá)的影響.pdf
- 間歇壓力對大鼠肝星狀細(xì)胞Ⅰ型膠原和TGF-β1表達(dá)影響的研究.pdf
- 脂筏介導(dǎo)的內(nèi)源性大麻素AEA對肝星狀細(xì)胞增殖活性作用的研究.pdf
- 羅格列酮對非酒精性脂肪性肝纖維化肝星狀細(xì)胞活化及PPARγ、TGFβ1表達(dá)的影響.pdf
- IGFBPrP1對肝星狀細(xì)胞TGFβ1-Smad3及ERK1-2信號通路的影響及意義.pdf
- 丹參素對肝星狀細(xì)胞TGF-β1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響.pdf
- 川芎嗪和siRNA沉默TGF-β1對大鼠肝星狀細(xì)胞CTGF表達(dá)的影響.pdf
- 雌二醇代謝產(chǎn)物對肝星狀細(xì)胞增殖和TGF-β1、CTGF表達(dá)的影響.pdf
- TGF-β1對肝星狀細(xì)胞的活化作用及機(jī)制.pdf
- 褪黑素對肝星狀細(xì)胞中TGF-β1-Smad信號通路的影響.pdf
- CREB-1對肝星狀細(xì)胞TGF-β3表達(dá)及其啟動子活性的影響.pdf
- 丹參素對肝星狀細(xì)胞TGFβ1-Smads-ERK信號通路的影響.pdf
- 二次創(chuàng)傷對實驗性松質(zhì)骨缺損修復(fù)及內(nèi)源性VEGF、TGF-β1表達(dá)的影響.pdf
評論
0/150
提交評論