健脾化瘀解毒方調(diào)控Wnt通路介導(dǎo)胃癌前病變大鼠Lgr5+細(xì)胞的機(jī)制研究.pdf

1、廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是個(gè)人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)特別加以注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明并致謝。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名日期：幻I眸2n沙日關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解廣州中醫(yī)藥大學(xué)有關(guān)保留使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意

2、學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許被查閱和借閱。本人授權(quán)廣州中醫(yī)藥大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)印手段保存和匯編本學(xué)位論文。(保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定)論文作者簽名么弛論文導(dǎo)師簽名日期：撕薩占月鶿日SPF級雄性SD大鼠77只，6—8周鼠齡，體質(zhì)量1201409，隨機(jī)分為空白組(10只)、模型組(15只)、維酶素組(13只，02gkg～d叫)、解毒方15g

3、kg～d。1劑量組(13只，解毒方A組)、解毒方75gkg～d1劑量組(13只，解毒方B組)、解毒方375gkg一d_1劑量組(13只，解毒方C組)，共6組?？瞻捉M大鼠常規(guī)飼養(yǎng)，不予任何造模因素。模型組、維酶素組、解毒方各組大鼠給予200ugmLlN一甲基一N’一硝基N亞硝基胍(MNNG)溶液自由飲用，配合饑飽失常法、小承氣湯灌胃的綜合造模方法復(fù)制胃癌前病變大鼠模型，持續(xù)19周。第9周從模型組隨機(jī)選擇2只大鼠，處死后取胃黏膜組織，確認(rèn)出

4、現(xiàn)胃黏膜腸上皮化生病變后，治療組連續(xù)灌胃給藥共10周。第19周，處死全部大鼠后取小彎側(cè)胃體一竇交界處胃黏膜，制備胃黏膜上皮組織。采用ABPAS染色法光鏡下觀察各組大鼠胃黏膜上皮腸上皮化生病變情況(腸上皮化生病灶范圍及程度)；HE染色法光鏡下觀察各組大鼠胃黏膜上皮異型增生病變情況(主要包括胃黏膜上皮細(xì)胞異型性改變、腺體結(jié)構(gòu)紊亂、異常分化狀態(tài))；透射電鏡下觀察各組大鼠胃黏膜上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化(主細(xì)胞、壁細(xì)胞的細(xì)胞核形態(tài)、大小、染色質(zhì)分布、

5、核間隙、核漿比、胞漿空泡樣變、線粒體結(jié)構(gòu)、微管泡結(jié)構(gòu))。熒光定量RT—qPCR法檢測各組大鼠胃黏膜上皮細(xì)胞CmycmRNA表達(dá)。免疫組化法檢測各組大鼠胃黏膜上皮Lgr5表達(dá)，光鏡下觀察Lgr5細(xì)胞在胃腺體的空間分布、Lgr5細(xì)胞數(shù)目變化。免疫組化法檢測各組大鼠胃黏膜上皮Wntl蛋白、Wnt3a蛋白、B—catenin蛋白、MMP一7蛋白的表達(dá)。結(jié)果：①胃黏膜HE染色顯示，模型組大鼠胃黏膜上皮出現(xiàn)了異型增生病變(腺體結(jié)構(gòu)不完整、排列擁擠、

6、邊界不清楚，甚至分支和折疊現(xiàn)象，細(xì)胞核深染，呈雪茄樣改變，可見細(xì)胞核假復(fù)層改變，細(xì)胞核極性減弱，核分裂征象常見)。AB—PAS染色發(fā)現(xiàn)模型組大鼠出現(xiàn)彌漫性腸上皮化生病變(胃黏膜上皮發(fā)現(xiàn)范圍較大的藍(lán)染灶)。以上均表明胃癌前病變大鼠模型復(fù)制成功。數(shù)據(jù)顯示，與模型組相比，解毒方各組大鼠彌漫性腸上皮化生發(fā)病率顯著降低(尸005)。②透射電鏡結(jié)果顯示，模型組大鼠胃黏膜上皮主細(xì)胞、壁細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞核異形改變、核漿比增大、染色質(zhì)異常，此外可見細(xì)胞核固縮

7、、核碎裂形成、核間隙增寬、胞漿內(nèi)大量空泡樣變。另外，主細(xì)胞可見內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量明顯減少、少量殘存，壁細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)破壞、數(shù)量減少，微管泡結(jié)構(gòu)破壞、或見部分管腔擴(kuò)張。解毒方各組主細(xì)胞、壁細(xì)胞的病變程度較模型組相比具有一定程度改善，主要表現(xiàn)為細(xì)胞核漿比趨于正常、胞漿空泡樣變減少、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)數(shù)量部分恢復(fù)。③正常胃黏膜上皮見Lgr5陰性表達(dá)或僅在胃黏膜隱窩底部見到少量散在的Lgr5細(xì)胞。而模型組胃癌前病變大鼠胃黏膜上皮Lgr5細(xì)胞數(shù)目顯著增多，密集分