轉化生長因子-β激活激酶1抑制劑對糖尿病db-db小鼠腎臟的可能作用及機制.pdf

1、目的：
　　本研究將轉化生長因子-β激活激酶1（TGF-β activated kinase-1，TAK1）抑制劑作用于糖尿病 db/db小鼠，檢測小鼠一般指標的變化，通過PAS染色、透射電鏡觀察腎組織病理形態(tài)學變化，采用免疫組化、Western blot蛋白印跡法等方法檢測腎組織相關炎癥指標的表達，探討TAK1抑制劑(5Z-7-oxozeaenol，OZ)對糖尿病db/db小鼠腎臟的可能作用及機制。
　　方法：
　　

2、將12只健康雄性WT小鼠，24只健康雄性db/db小鼠隨機分為3組：1.健康對照組，即WT組，包含12只WT小鼠；2.模型組，即db/db組，包含12只db/db組；2.抑制劑組，即db/db+OZ組，包含12只db/db小鼠，OZ2mg/kg隔日腹腔注射。于用藥后第8，12周末分別測定各組小鼠的血糖、體重、腎重及24h尿白蛋白排泄率；光鏡、電鏡觀察腎組織的病理改變；免疫組化方法檢測炎癥相關指標NF-κB p65, MCP-1,TNF-

3、α及TGF-β1的表達情況；Western blot方法檢測p-TAK1, TAB1及IL-1β蛋白表達。
　　結果：
　　1.db/db小鼠逐漸出現多飲、多食、多尿及消瘦等糖尿病癥狀，而db/db+OZ組小鼠上述癥狀有所減輕。
　　2.8-12周db/db小鼠血糖、體重、腎重、UAER較WT小鼠明顯升高，比較有顯著差異(P<0.01)，而db/db+OZ小鼠較db/db小鼠相比體重、腎重、UAER明顯下降，差異有統(tǒng)計

4、學意義(P<0.05, P<0.01)。
　　3.PAS染色觀察8-12周WT小鼠PAS強陽性范圍較少；db/db小鼠PAS強陽性范圍較對照組明顯增多；而db/db+OZ小鼠PAS強陽性范圍較db/db組減少。
　　4.電鏡觀察8-12周 WT小鼠腎小球基底膜均勻一致，無電子致密物沉積，足突分布均勻無融合；db/db小鼠第8周開始腎小球系膜細胞及系膜基質增生，基底膜不規(guī)則增厚，局部呈丘狀隆起，相鄰足突出現融合或脫落，12周病

5、變更加嚴重；db/db+OZ小鼠病變明顯減輕。
　　5.免疫組化法示8-12周 db/db小鼠腎組織 NF-κB p65，MCP-1，TNF-α, TGF-β1表達較WT小鼠明顯增強，比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；而db/db+OZ組小鼠與db/db小鼠相比表達明顯減弱，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　6.Western blot結果示8-12周db/db小鼠p-TAK1, TAB1, IL-1β蛋白表達較W

6、T小鼠增加(P<0.05)，而db/db+OZ組小鼠較db/db小鼠腎組織這些指標蛋白表達下降(P<0.05)。
　　結論：
　　1.應用TAK1抑制劑注射后檢測糖尿病 db/db小鼠腎組織相關指標的表達，發(fā)現NF-κB p65，p-TAK1, TAB1的表達下調及MCP-1，TGF-β1,TNF-α及IL-1β等相關因子的表達明顯下降；
　　2. TAK1抑制劑可能通過抑制TAK1的表達下調NF-κB信號通路，減少炎