槲皮素抑制SGC-7901細(xì)胞增殖及相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、1、目的與意義：
　　槲皮素是一種常見的膳食抗氧化劑，為類多酚黃酮類化合物，其基本理化性質(zhì)為：溶于冰醋酸，遇見堿性水溶液呈現(xiàn)出黃色，幾乎不溶于水。有關(guān)槲皮素的藥理作用，最近幾年受到廣泛關(guān)注，比如：抗菌、抗炎、抗癌、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)和保護(hù)心血管等方面的作用。而在抗腫瘤這一塊，有研究發(fā)現(xiàn)：槲皮素可以增加細(xì)胞色素C還原酶、還原型輔酶Ⅱ（NADPH）、谷胱甘肽還原酶和DF-硫辛酰胺脫氫酶的活性從而達(dá)到抗癌的藥理作用。針對(duì)于癌癥種類，也有前

2、列腺癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞等等方面，然而針對(duì)于胃癌方面的報(bào)道，或更深層次的作用機(jī)制，現(xiàn)研究報(bào)道中并不明確。本研究先以槲皮素對(duì)胃癌細(xì)胞的增殖抑制情況著手，然后深以探究抑制增殖背后的相關(guān)作用機(jī)制。
　　2、方法：
　　2.1.槲皮素對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞的增殖抑制情況
　　以SGC-7901為研究對(duì)象，結(jié)合MTT和結(jié)晶紫兩種實(shí)驗(yàn)方法，采用12h、18h、24h三個(gè)作用時(shí)間段給予細(xì)胞藥物刺激，將MTT得到的數(shù)據(jù)繪

3、制成表；結(jié)晶紫實(shí)驗(yàn)方面，除了三組結(jié)晶紫圖片外，分別將每孔中的結(jié)晶紫以乙酸溶解，測(cè)定每孔OD值并繪制成圖。對(duì)比研究槲皮素對(duì)SGC-7901的增殖抑制情況。
　　2.2.槲皮素對(duì)于胃癌SGC-7901細(xì)胞周期的影響
　　以前續(xù)MTT和結(jié)晶紫實(shí)驗(yàn)結(jié)果為先決條件，篩選出最適宜的藥物作用時(shí)間， 收集細(xì)胞后，以流式細(xì)胞技術(shù)為方法，觀察槲皮素對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞周期分布的影響情況。
　　2.3.槲皮素對(duì)于胃癌SGC-

4、7901細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
　　以流式細(xì)胞術(shù)判斷出槲皮素對(duì)于SGC-7901作用后的阻滯周期，再采用Western Blotting實(shí)驗(yàn)方法，檢測(cè)槲皮素對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞中，其ATM和p-ATM、H2AX和rH2AX、Cdc25C和p-Cdc25C、Chk2和p-Chk2、Cdk2和p-Cdk2、CyclinA等細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的蛋白表達(dá)影響。
　　3、結(jié)果：
　　3.1.槲皮素對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞的

5、增殖抑制情況
　　MTT實(shí)驗(yàn)中，三組藥物作用時(shí)間對(duì)比可看出，隨著槲皮素濃度的增加，其增殖抑制情況皆呈現(xiàn)出劑量依賴性關(guān)系，同一濃度下，隨著作用時(shí)間的遞增，槲皮素藥物對(duì)于SGC-7901的增殖抑制作用，也隨之變高。在結(jié)晶紫實(shí)驗(yàn)中，隨著藥物濃度的遞增，結(jié)晶紫的吸光度值隨之減少，每一孔內(nèi)的結(jié)晶紫也隨之減少。無(wú)論是從結(jié)晶紫圖上的結(jié)晶紫殘留量，還是測(cè)得對(duì)應(yīng)孔里殘留結(jié)晶紫的吸光度值，都能得出槲皮素對(duì)于SGC-7901有著不錯(cuò)的抑制效果，然而在人

6、體胚胎細(xì)胞對(duì)照試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)以100μM為藥物濃度時(shí)，24h藥物作用時(shí)間組出現(xiàn)大量細(xì)胞死亡的現(xiàn)象，因而在藥物作用時(shí)間上，18h作用時(shí)間更加適宜。
　　3.2.槲皮素對(duì)于胃癌SGC-7901細(xì)胞周期的影響
　　流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示，隨著槲皮素劑量的增加，SGC-7901的細(xì)胞周期S期呈不斷攀升的趨勢(shì)，彼此間為劑量依賴性關(guān)系；當(dāng)藥物濃度為120μmol/ml時(shí)，S期所占比例更是達(dá)到了56.91％，超出了百分比的一半，且具有顯著性差異

7、。
　　3.3.槲皮素對(duì)于胃癌SGC-7901細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
　　在Western Blotting實(shí)驗(yàn)里，在隨著藥物濃度增加，相關(guān)蛋白表達(dá)量上，其p-ATM、rH2AX、p-Chk2、p-Cdk2蛋白表達(dá)量皆隨著藥物濃度的遞增而呈現(xiàn)出上升的趨勢(shì)。Cdc25A蛋白表達(dá)量隨之減少，而CyclinA則基本保持不變。
　　4、結(jié)論：
　　4.1.在增殖抑制實(shí)驗(yàn)中，無(wú)論是MTT的數(shù)據(jù)結(jié)果，還是結(jié)晶紫的圖表結(jié)果，皆

8、能得出槲皮素對(duì)于SGC-7901有著不錯(cuò)的增殖抑制效果，且三組藥物作用時(shí)間對(duì)比，18h藥物作用時(shí)段為最佳。
　　4.2.通過流失細(xì)胞技術(shù)，很直觀的得出：槲皮素阻滯SGC-7901細(xì)胞周期于S期。
　　4.3.p-ATM、rH2AX、p-Chk2、p-Cdk2蛋白表達(dá)量的上升，Cdc25A蛋白表達(dá)量的減少，CyclinA表達(dá)量的基本不變，闡明了槲皮素是通過磷酸化一系列的細(xì)胞周期相關(guān)蛋白而發(fā)揮抑制效率的，而DNA損傷信號(hào)通路，很