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1、目的:探討Toll樣受體7激動(dòng)劑T7-利尿酸偶合物(T7-EA)聯(lián)合受體酪氨酸激酶樣孤兒受體1(ROR1)抗乳腺癌的作用。
方法:采用Syfpeithi表位預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)ROR1的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)的表位;ELISA檢測(cè)不同濃度的T7-EA(0、0.01、0.1、0.5、1、2、4、8、16、20、24μmol/L)誘導(dǎo)脾淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子γ干擾素(IFN-γ)和白細(xì)胞介素12(IL-12)的水平; ELISA檢測(cè)
2、4μmol/L T7-EA、4μmol/L ROR1和4μmol/L T7-EA聯(lián)合4μmol/L ROR1分別誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞和骨髓來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)產(chǎn)生的細(xì)胞因子IFN-γ、IL-12和腫瘤壞死因子α(TNF-α);BALB/c小鼠皮下接種乳腺癌4T1細(xì)胞建立移植瘤模型,腹腔分別注射3 mg/kg T7-EA,15 mg/kg ROR1,3 mg/kg T7-EA聯(lián)合15 mg/kg ROR1,每周1次,免疫治療4次后處死小
3、鼠檢測(cè)腫瘤重量;乳酸脫氫酶(LDH)法測(cè)定特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)的活性;ELISA檢測(cè)血清中針對(duì)4T1細(xì)胞腫瘤蛋白的IgG水平。
結(jié)果:在預(yù)測(cè)的多條ROR1 CTL表位肽中選取序列PYCDETSSV作為疫苗多肽;體外實(shí)驗(yàn)顯示T7-EA活化淋巴細(xì)胞呈現(xiàn)劑量依賴性,與ROR1相關(guān)多肽混合后不改變其活性;T7-EA與ROR1合用誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ和IL-12,刺激DC產(chǎn)生TNF-α;體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示 T7-EA
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