Toll樣受體4介導(dǎo)乳腺癌侵襲能力增強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:Toll樣受體介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)在多種腫瘤細(xì)胞的侵襲、生存和轉(zhuǎn)移中的作用已經(jīng)被了解。本研究旨在研究Toll樣受體4(TLR4)在人類乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)及其在腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移中的生物學(xué)作用,探討其作為腫瘤治療靶點(diǎn)的潛在作用。
　　方法:本研究采用MCF-7和MDA-MB-231低轉(zhuǎn)移和高轉(zhuǎn)移能力的人類乳腺癌細(xì)胞株。體外實(shí)驗(yàn),LPS刺激兩株細(xì)胞后,分別采用RT-PCR、Real-time PCR、FCS和western blott

2、ing等方法檢測(cè)TLR4在基因和蛋白水平的表達(dá)。TLR4受LPS激活后,采用RT-PCR和 Real-time PCR檢測(cè)腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因MMP-2、MMP-9和 VEGF的表達(dá);并采用ELISA檢測(cè)其對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)上清中的蛋白表達(dá)水平。采用Western blot檢測(cè)TLR4信號(hào)傳導(dǎo)通路下游蛋白MyD88的表達(dá)。細(xì)胞培養(yǎng)上清中的炎性細(xì)胞因子采用CBA方法進(jìn)行測(cè)定。體內(nèi)實(shí)驗(yàn),向雌性BALB/c裸鼠腋下皮下注射MCF-7和MDA-MB-231

3、細(xì)胞株構(gòu)建人類乳腺癌腫瘤轉(zhuǎn)移模型。觀測(cè)移植瘤生長(zhǎng)體積及重量;采用免疫組化方法檢測(cè)移植瘤中TLR4表達(dá)情況;通過(guò)鏡下觀察分離肝和肺組織尋找轉(zhuǎn)移灶的方法對(duì)移植瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況進(jìn)行評(píng)估。收集乳腺癌患者腫瘤組織及癌旁組織,采用RT-PCR、Real-time PCR和免疫組化方法檢測(cè)腫瘤組織中的TLR4表達(dá)情況,分析TLR4表達(dá)與乳腺癌病情進(jìn)展的關(guān)系。
　　結(jié)果:體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,LPS刺激MCF-7和MDA-MB-231兩株細(xì)胞均能引起T

4、LR4基因和蛋白水平表達(dá)的上調(diào)。MTT檢測(cè)結(jié)果顯示,LPS對(duì)兩株細(xì)胞的增殖沒(méi)有影響。LPS激活TLR4后,腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因MMP-2、MMP-9和VEGF在基因和蛋白水平的表達(dá)均明顯上調(diào)。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)表明,LPS能明顯增強(qiáng)MDA-MB-231細(xì)胞株的侵襲能力;劃痕實(shí)驗(yàn)表明,LPS能顯著增強(qiáng)MCF-7細(xì)胞株的侵襲能力。此外,LPS刺激能誘導(dǎo)TLR4信號(hào)通路下游MyD88蛋白表達(dá)的顯著上調(diào),促進(jìn)IL-6和IL-10的分泌。體內(nèi)