靶向沉默甲胎蛋白表達對人肝癌細胞HepG2細胞功能學(xué)的研究.pdf

1、目的：構(gòu)建靶向沉默甲胎蛋白的慢病毒載體并評價沉默效果。探討沉默甲胎蛋白表達對人肝癌細胞系HepG2細胞功能學(xué)方面的影響，為后續(xù)對肝癌侵襲及轉(zhuǎn)移方面實驗研究建立細胞模型。
　　方法：采用RNA干擾技術(shù)構(gòu)建靶向沉默AFP基因的慢病毒載體，轉(zhuǎn)染HepG2細胞，在熒光倒置顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染后綠色熒光細胞的數(shù)量，再用嘌呤霉素篩選純化以獲得穩(wěn)定沉默甲胎蛋白的細胞系。采用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染組及對照組肝癌細胞中AFP的mRNA表達水平；

2、Western blotting檢測沉默后AFP的蛋白表達水平變化；MTT法檢測轉(zhuǎn)染組及對照組肝癌細胞的增殖情況；運用Tranwell實驗檢測細胞的侵襲能力；Wound Healing實驗檢測細胞的遷移能力。
　　結(jié)果：沉默組AFP在mRNA水平較空白組下降約90％（P＜0.05），在蛋白表達水平下降（62.53±6.17）%（P＜0.05）；MTT法結(jié)果顯示沉默組細胞培養(yǎng)6天后，細胞增值率下降（31.17±1.16）%（P＜0.

3、05）；Transwell實驗沉默組細胞侵襲個數(shù)較空白組和陰性組降低明顯，依次為(174.80±16.20)個、(315.25±19.70)個、(304.60±20.30)個，（P＜0.05）；Wound Healing實驗48h后，沉默組遷移率較空白組和陰性組明顯下降，分別為(29.96±6.79)%、(54.77±9.24)%、(49.04±8.31)%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:靶向沉默AFP的慢病毒載