CDK2干擾RNA對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2全細(xì)胞蛋白質(zhì)組的影響.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:觀察穩(wěn)定轉(zhuǎn)染CDK2干擾RNA對(duì)人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞周期、增殖活性及全蛋白質(zhì)組表達(dá)的變化,以探討CDK2在肝癌生物學(xué)進(jìn)程中的作用,為肝癌發(fā)病機(jī)理的研究及其早期診斷、治療提供新的、有效的分子靶點(diǎn)。 方法:應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù),構(gòu)建CDK2干擾RNA真核表達(dá)載體PGnesil-1-CDK2,并用脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞,G418篩選陽(yáng)性轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆,檢測(cè)其細(xì)胞周期、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的改變,通過(guò)RT-PCR及雙向

2、凝膠電泳一質(zhì)譜技術(shù)比較轉(zhuǎn)染前后CDK2 mRNA的表達(dá)和全細(xì)胞蛋白質(zhì)的變化。 結(jié)果: (1)成功構(gòu)建CDK2干擾RNA真核表達(dá)載體PGenesil-1-CDK2,并用脂質(zhì)體法導(dǎo)入肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞中,且有效表達(dá),使HepG2細(xì)胞中CDK2 mRNA表達(dá)水平降低。 (2)CDK2干擾RNA轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后,經(jīng)G418篩選獲得陽(yáng)性克隆命名為PCDK2-siRNA-HepG2。與轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組的PHK-siRN

3、A-HepG2細(xì)胞和未轉(zhuǎn)染組的HepG2細(xì)胞相比,PCDK2-siRNA-HepG2組細(xì)胞的生長(zhǎng)速度減慢,G1期細(xì)胞增多,G2/M和S期細(xì)胞減少。 (3)通過(guò)雙向電泳-圖像分析-質(zhì)譜技術(shù)得到10個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。其中7種在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染組細(xì)胞PCDK2-siRNA-HepG2中不表達(dá),3種表達(dá)下調(diào)。 結(jié)論: (1)成功構(gòu)建CDK2干擾RNA真核表達(dá)載體PGenesil-1-CDK2。 (2)CDK2干擾RNA

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