羥氯喹抑制自噬活性逆轉(zhuǎn)白血病K562-ADM細(xì)胞耐藥性.pdf

1、分類號(hào)：分類號(hào)：Q5密級(jí)：密級(jí)：公開公開研究生學(xué)位論文論文題目（中文）論文題目（中文）羥氯喹抑制自噬活性逆轉(zhuǎn)白血病K562ADM細(xì)胞耐藥性論文題目（外文）論文題目（外文）HydroxychloquinereversesdrugresistanceofleukemicK562ADMcellsbyinhibitionofautophagy研究生姓名研究生姓名王菲菲學(xué)科、專業(yè)學(xué)科、專業(yè)生物學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向研究方向腫瘤細(xì)胞分子生物

2、學(xué)學(xué)位級(jí)別學(xué)位級(jí)別碩士導(dǎo)師姓名、職稱導(dǎo)師姓名、職稱魏虎來教授論文工作論文工作起止年月起止年月2013年9月至2016年3月論文提交日期論文提交日期2016年3月論文答辯日期論文答辯日期2016年5月學(xué)位授予日期學(xué)位授予日期校址：甘肅省蘭州市校址：甘肅省蘭州市I羥氯喹羥氯喹抑制自噬抑制自噬活性逆轉(zhuǎn)活性逆轉(zhuǎn)白血病白血病K562ADMK562ADM細(xì)胞細(xì)胞耐藥性耐藥性中文摘要中文摘要背景背景自噬是存在于真核細(xì)胞的依賴溶酶體降解來清除衰老及損傷

3、細(xì)胞器和生物大分子物質(zhì)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)再利用的生物學(xué)過程。自噬與腫瘤的關(guān)系非常密切，腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中自噬活性具有兩面性：一方面機(jī)體可利用自噬作用殺傷或清除腫瘤細(xì)胞，另一方面腫瘤細(xì)胞也可依賴自噬作用獲取相對(duì)較好的生存環(huán)境。當(dāng)腫瘤細(xì)胞遭受抗癌藥物和輻射等壓力刺激時(shí)，腫瘤細(xì)胞可通過自噬來對(duì)抗藥物和射線的細(xì)胞毒性，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的耐受性。有關(guān)自噬活性與腫瘤細(xì)胞耐藥性的關(guān)系研究有望通過調(diào)控自噬活性來干預(yù)腫瘤耐藥性問題。目的目的本課題擬通過比較研究白血

4、病敏感細(xì)胞和耐藥性細(xì)胞的基礎(chǔ)性及誘發(fā)性自噬活性的差異，探討能否通過采用自噬抑制劑羥氯喹抑制細(xì)胞自噬活性來克服白血病細(xì)胞的藥物耐受性，并探討自噬與白血病細(xì)胞耐藥性的相關(guān)性。方法方法以白血病藥物敏感K562細(xì)胞和耐藥K562ADM細(xì)胞為模型，檢測(cè)細(xì)胞基礎(chǔ)自噬活性，營養(yǎng)剝奪（饑餓）和阿霉素（ADM）處理誘導(dǎo)細(xì)胞自噬；羥氯喹預(yù)處理后檢測(cè)細(xì)胞對(duì)ADM的敏感性。采用透射電鏡和單丹磺酰尸胺（MDC）熒光染色觀察細(xì)胞自噬形態(tài)學(xué)；采用吖啶橙（AO）溴乙錠

5、（EB）雙染觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)；MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性；實(shí)時(shí)熒光定量RTPCR法檢測(cè)beclin1、bax、bcl2和mdr1基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl2和耐藥蛋白Pgp的表達(dá)以及Caspase3活性；Westernblot檢測(cè)LC3III、Beclin1、Bax、Bcl2、Caspase3、Pgp的表達(dá)以及P62的水平。結(jié)果K562ADM細(xì)胞對(duì)阿霉素具有很高的耐受性，12h、24h、48h的半