低頻超聲增強(qiáng)阿霉素對白血病耐藥細(xì)胞株K562-Adm效應(yīng)的實驗研究.pdf

1、目的：本課題研究低頻超聲(Ultrasound，US)增強(qiáng)阿霉素(Adramycin，Adm)對人慢性粒細(xì)胞白血病急性白血病變細(xì)胞耐藥細(xì)胞株K562/Adm的殺傷作用，初步探討低頻超聲逆轉(zhuǎn)多藥耐藥的作用機(jī)理，為低頻率超聲促進(jìn)化療藥物治療惡性腫瘤以及在體外血液凈化應(yīng)用方面提供理論依據(jù)。 方法：利用東南大學(xué)江蘇鐵醫(yī)美達(dá)康醫(yī)療設(shè)備廠生產(chǎn)的NTY-300型多功能超聲手術(shù)裝置(以下簡稱NTY裝置，20KHz,輸出功率0～30.0W)，進(jìn)行

2、離體實驗。K562/Adm細(xì)胞株接受阿霉素、不同參數(shù)超聲照射以及兩者聯(lián)合干預(yù)。采用臺盼藍(lán)染色法、MTT法檢測選擇出較佳的超聲強(qiáng)度、聲照時間、阿霉素藥物的濃度等參量，確定能增強(qiáng)阿霉素對體外培養(yǎng)的K562/Adm的細(xì)胞毒作用及逆轉(zhuǎn)藥物的耐受性的干預(yù)參數(shù)。Adm組：僅給予阿霉素處理；US組：給予超聲輻射；Adm+US組：給予阿霉素后予以超聲輻射，另設(shè)空白對照組。瑞氏染色法和透射電鏡觀察超聲單獨(dú)或聯(lián)合阿霉素作用細(xì)胞后的凋亡及細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)改變情況

3、。流式細(xì)胞儀檢測超聲作用后細(xì)胞內(nèi)阿霉素藥物濃度含量。掃描電鏡觀察超聲輻射細(xì)胞后細(xì)胞表面的改變。細(xì)胞免疫細(xì)胞化學(xué)(Immunocytochemistry，ICC)法檢測超聲單獨(dú)作用于K562/Adm細(xì)胞后細(xì)胞耐藥蛋白P-gp表達(dá)的變化。 結(jié)果：1.低頻低功率超聲單獨(dú)作用于K562/Adm細(xì)胞，①聲強(qiáng)不大于0.17W·cm-2時，超聲輻射對細(xì)胞的殺傷效應(yīng)不明顯(P＞0.05)；0.50W·cm-2聲強(qiáng)的超聲輻射，可造成細(xì)胞急性死亡：

4、②相同功率的超聲，隨輻射時間延長，細(xì)胞抑制率無明顯變化(P＞0.05)；③超聲輻射的遲發(fā)效應(yīng)與超聲功率相關(guān)，功率大于0.1W·cm-2時，遲發(fā)效應(yīng)顯著(P＜0.05)，但24小時后無差異性；低功率輻射時遲發(fā)效應(yīng)無顯著影響(P＞0.05)。2.阿霉素單獨(dú)作用細(xì)胞，細(xì)胞存活率隨藥物作用的濃度、孵育時間增加而下降，有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)。3.超聲和阿霉素有協(xié)同作用，單用阿霉素22.30μg·ml-1，0.10W·cm-2超聲功率+阿

5、霉素濃度為20.03μg·ml-1，0.17W·cm-2超聲功率+阿霉素濃度12.46μg·ml-1，0.25W·cm-2的超聲功率＋阿霉素濃度11.08μg·ml-1時腫瘤細(xì)胞均達(dá)到IC50值。對干預(yù)參數(shù)進(jìn)行篩選，在超聲聲強(qiáng)0.17W·cm-2、輻射時間為30秒，聯(lián)合阿霉素作用后孵育時間48小時條件下的實驗結(jié)果為佳，采用該參數(shù)進(jìn)行下列實驗。4.透射電鏡和瑞氏染色，單用超聲干預(yù)組，與對照組相比較無明顯差異性；單用阿霉素組可見少量凋亡細(xì)胞

6、；超聲聯(lián)合阿霉素組可見大量細(xì)胞凋亡。5.流式細(xì)胞儀檢測顯示與對照組及單用阿霉素組相比，阿霉素加超聲組細(xì)胞內(nèi)藥物濃度聚集量顯著增加。6.掃描電鏡發(fā)現(xiàn)單純超聲組細(xì)胞的細(xì)胞膜表面在超聲輻射后出現(xiàn)形態(tài)學(xué)的變化：顆粒和放射冠減少，出現(xiàn)許多大小不一的小孔，大多直徑在1～2μm，最大直徑在7μm；7.免疫細(xì)胞化學(xué)顯示與對照組相比，單純超聲組細(xì)胞P-gp蛋白含量沒有顯著變化。 結(jié)論：(1)在20KHz頻率下，較高聲強(qiáng)超聲輻射可直接殺傷腫瘤細(xì)胞，