苦參堿逆轉(zhuǎn)T24-ADM細胞耐藥性的研究.pdf

1、目的:復(fù)蘇T24／ADM細胞并檢測其耐藥性。觀察苦參堿對T24／ADM細胞毒性以確定非毒性劑量的濃度范圍。觀察苦參堿對T24／ADM細胞抑制率和檢測細胞P-gp的表達變化的影響,以探討研究苦參堿對T24／ADM細胞耐藥逆轉(zhuǎn)的作用。
　　 方法:檢測T24／ADM具有耐藥性。將本導(dǎo)師組凍存的T24細胞與T24／ADM細胞進行復(fù)蘇,復(fù)蘇成功后加入阿霉素培養(yǎng)(藥物濃度分別為0.01μg／ml、0.5μg／ml、1.0μg／ml、2.0

2、μg／ml、4.0μg／ml)。倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化及生長情況。MTT法檢測細胞對藥物的耐受性,流式細胞術(shù)檢測P-gp的表達。
　　 MTT法檢測苦參堿對T24／ADM細胞的毒性作用。將苦參堿按不同濃度分組加入到T24／ADM測定其細胞毒性并確定非毒性濃度。實驗組加入苦參堿(藥物濃度分別為10μg／ml、20μg／ml、30μg／ml、40μg／ml、50μg／ml、60μg／ml),對照組只加等體積的培養(yǎng)基不加藥物。<

3、br>　　 將非毒性濃度苦參堿按不同濃度分組(藥物濃度分別為0.0μg／ml、10μg／ml、20μg／ml、30μg／ml、40μg／ml、50μg／ml),加入到T24／ADM測定各組細胞抑制率和檢測細胞P-gp的表達變化并確定最佳逆轉(zhuǎn)濃度。
　　 結(jié)果:檢測T24／ADM的耐藥性。在倒置顯微鏡下觀察,T24／ADM與T24細胞形態(tài)特征明顯變化。T24／ADM對ADM有明顯的耐藥性(IC50為7.37μg／m／),T24／

4、ADMP-gp的表達明顯增高。經(jīng)方差分析,各濃度間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 測定苦參堿對T24／ADM細胞毒性。通過劑量效應(yīng)曲線可以確定苦參堿的非細胞毒性劑量(生長率>95％)為50μg／mL,因此把非細胞毒性劑量作為逆轉(zhuǎn)濃度范圍。
　　 苦參堿逆轉(zhuǎn)試驗及確定最佳逆轉(zhuǎn)濃度。MTT法檢測耐藥細胞的抑制率,運用單因素方差分析得出A組(不加苦參堿)和B1組(10μg／ml)及B1組(10μg／ml)和B2組(2

5、0μg／ml)組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),其余各組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。流式細胞術(shù)檢測耐藥細胞P蛋白表達,運用單因素方差分析得出B1組(10μg／ml)和B2組(20μg／ml)、B2組(20μg／ml)和B3組(30μg／ml)、B3組(30μg／ml)和B4組(40μg／ml)組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),其余各組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。并且確定苦參堿濃度為50μg／ml時逆轉(zhuǎn)效果最大